[发明专利]一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡新品系的选育方法

权利要求书

1.一种节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）利用邵伯鸡S3系作为父本，隐性白羽鸡作为母本进行杂交，生产出F1代；邵伯鸡S3系为黄羽、青矮胫，隐性白羽鸡为隐性白羽、正常黄胫；

（2）在F1代中选择白羽、青矮胫的母鸡作为母本，选择白羽、正常青胫的公鸡作为父本；

（3）利用AS-PCR方法测定留做公母鸡亲本F1代的羽色基因型，选留基因型为cc型的纯合隐性白羽、青矮胫母鸡和纯合隐性白羽、正常青胫的公鸡，淘汰基因型为CC或Cc的有色羽或白羽公母鸡；

（4）将F1代中鉴定出的纯合隐性白羽、青矮胫的母鸡和纯合隐性白羽、正常青胫的公鸡进行自交，产生F2代；

（5）利用普通PCR方法测定F2代中青胫公母鸡的矮小基因的基因型，选留纯合矮小基因dwdw基因型个体，淘汰DWDW/DWdw基因型个体，得到节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系；

所述步骤（1）中隐性白羽鸡为TYR基因第4内含子插入7.7kb逆转录病毒后产生的隐性白羽鸡；

所述步骤（3）中利用AS-PCR测定F1代留种的青胫白羽鸡羽色基因型的方法，包括以下步骤：以待测鸡基因组DNA为模板，以引物对P1和P2的混合引物扩增TYR基因和插入逆转录病毒基因，对扩增得到的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定鸡羽色基因型；

所述的引物对P1为：

上游引物，P1-F：5’-tagcactggaaatagtaaacccagt-3’；

下游引物，P1-R：5’-agatctgatgggcttgcttgaggta-3’；

所述引物对P2为：

上游引物， P2-F：5’-tagcactggaaatagtaaacccagt-3’；

下游引物，P2-R：5’-tgctgaaaggactgcttttggggct-3’；

所述的鉴定鸡隐性白羽基因型的方法为：CC基因型仅为284bp条带，表现有色羽；Cc基因型为284bp和771bp条带，表现为有色羽或白羽；cc基因型仅为771条带，表现为隐性白羽；

所述的鉴定的鸡矮小基因的方法为：DWDW基因型和DW/dw基因型均为483bp条带，表现为正常胫，dwdw基因型为没有任何条带，表现为矮小胫；

所述的AS-PCR反应体系为：10×PCR Buffer 2.5 μL，2 mmol/L dNTP 2.0 μL，5 U/μLTaq DNA聚合酶0.5 μL，P1或P2上游引物为1.0μL，P1和P2下游引物均为0.5μL， DNA模板1.0μL，ddH₂O 17.0 μL。

2.根据权利要求1所述的节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于：所述步骤（5）中利用普通PCR方法测定F2代留种的青矮胫隐性白羽鸡矮小基因的基因型方法，包括以下步骤：以待测鸡基因组DNA为模板，以引物对P3的混合引物扩增dw基因，对扩增得到的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定鸡dw基因的基因型；

所述引物对P3为：

上游引物P3-F：5’-cagcttgggcttgtgtgctgaaacca-3’

下游引物P3-R：5’-tcataattaaactacatcatgtagt-3’。

3.根据权利要求2所述的节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于：所述的普通PCR反应体系为：10×PCR Buffer 2.5 μL， 2 mmol/L dNTP 2.0 μL，5 U/μL Taq DNA聚合酶0.5 μL，所述引物P3的上、下游引物各1.0 μL，DNA模板1.0 μL，ddH2O 17.0 μL。

4.根据权利要求1或2所述的节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于：所述AS-PCR或普通PCR扩增的反应条件相同，具体为：95℃预变性5min，95℃变性30s，退火30s，72℃延伸30s，35个循环，72℃延伸10分钟，4℃保存；P1/P2和P3的退火温度分别为65℃和59℃。

5.根据权利要求1或2所述的节粮型青胫隐性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于：所述AS-PCR或普通PCR扩增的琼脂糖凝胶电泳的浓度为1.5%，所述的琼脂糖凝胶电泳的电压为120V，电泳时间为30min。