[发明专利]一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂及其制备方法，所述制剂包括含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞、外周血血浆蛋白和生理盐水。本发明利用含有女性特有染色体的干细胞可以治疗并预防由于男性雄激素水平过高引起的系列男性泌尿和生殖系统的良恶性肿瘤疾病。

技术领域

本发明涉及生物医疗技术和应用领域，尤其是涉及一种包含女性XX染色体的干细胞经培养制备，用于治疗前列腺、阴茎、睾丸等男性所特有的良恶性肿瘤的制剂及其制备方法。

背景技术

男性泌尿生殖系统肿瘤是危害男性健康治疗效果有限的性别疾病，特别是男性泌尿生殖系统癌，治疗方法有限，早期肿瘤有手术机会，但会造成器官功能丧失，治愈率有限。传统的手术治疗面临着手术意外、术后感染、菌血症、局部种植等风险。放射治疗对正常组织及重要器官的损害极大，而化学治疗同样面临着极其严重的毒副作用，如恶心、呕吐、脱发等。

男性泌尿生殖系统肿瘤的发病机制主要与雄性激素受体过高相关，女性染色体细胞可以分泌或旁分泌特异性雌性激素等，以及一些细胞因子，以此来调节雄性激素等水平，在一定程度上能够起到激素平衡化，抑制男性疾病发展的作用。同时体内可兼容男性和女性染色体。

现代治疗男科癌症的基本方法就是手术、放疗和化疗，手术可致器官缺如致畸；放化疗不仅对肿瘤组织有杀伤，而且对正常组织也有损伤，其过程痛苦给患者造成身心压力，因此寻求一种有效、无痛苦、最接近人体自然生物性状的细胞生物治疗方法，是目前男性特有疾病研究的热点。

发明内容

针对现有技术存在的上述治疗局限性，本发明申请人提供了一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂及其制备方法。本发明利用的女性胚胎源骨髓间充质干细胞来源充足、生物活性强、增殖能力强、定向分化能力强、低或无免疫原性、制备简便、可连续培养、反复冻存复苏后仍保存生物的特性、高分化潜能，细胞同质性高，具有正常的核型和端粒酶活性。本发明利用含有女性特有染色体的干细胞来治疗和解决并预防由于男性雄激素水平过高引起的系列男性泌尿和生殖系统的疾病。

本发明的技术方案如下：

一种用于治疗男性特有肿瘤的含有女性染色体干细胞的制剂，所述制剂包括含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞、外周血血浆蛋白和生理盐水。

所述制剂中含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞的浓度为(1-3)×10⁷个/mL，外周血血浆蛋白的用量为80～160ng/mL，余量为生理盐水，配成1mL制剂。

所述含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞的制备方法为：

(1)将检测合格的女性胚胎骨髓间充质干细胞放置在含血清的DMEM/F12培养基的培养瓶中培养，将培养瓶置于温度为37℃、饱和湿度、5％的CO ₂浓度的培养箱内开始培养，每2～3天更换一次培养液，去除未贴壁的细胞；

(2)培养3天时，细胞长满后用0.05％胰酶消化后离心收集细胞；

(3)将步骤(2)收集的细胞重复上述步骤继续传代培养，待细胞达到90％以上密度，进行消化、传代，收集第3～5代细胞冻存、复苏备用；

(4)采用流式细胞仪筛选出标记和粘附分子高表达CD105、CD73、CD44，不表达或低表达CD34和CD45的细胞，做染色体核型分析，即获得所述含有女性XX染色体的胚胎源骨髓间充质干细胞。

步骤(1)中所述DMEM/F12培养基中含有20mM/L HEPES、0.1％大豆胰酶抑制剂、25～50μg/mL转铁蛋白、10～20μg/mL纤粘连蛋白和20～60ng/mL的成纤维细胞生长因子-4。

步骤(1)中所述DMEM/F12培养基中血清的含量为10～15％。