[发明专利]一种产烟酸的游离型重组耻垢分枝杆菌及其构建方法

权利要求书

1.一种产烟酸的重组耻垢分枝杆菌，其特征在于，所述重组耻垢分枝杆菌含有重组游离型质粒，其中重组游离型质粒含有nudC基因，nudC基因核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.权利要求1所述重组耻垢分枝杆菌的构建方法，其特征在于，将含有nudC基因序列的重组游离型质粒转化入耻垢分枝杆菌。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述游离型质粒为pMV261质粒。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，采用电击法进行转化，电击参数是：电压2.5kV，电阻1000Ω，电容25μF。

5.权利要求1所述重组耻垢分枝杆菌在生产烟酸中的应用。

6.一种生产烟酸的方法，其特征在于，包括以下步骤，

S1.制备权利要求1所述的重组耻垢分枝杆菌；

S2.培养所述重组耻垢分枝杆菌；

S3.收集纯化培养液中的烟酸。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中，使用7H9液体培养基进行培养。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中，收集培养液中的烟酸的具体做法为：使用无菌滤器过滤培养液并收集滤液，用超滤浓缩管去除滤液中的蛋白质及其他大分子物质并收集滤液，进行高效液相色谱分析，分离烟酸。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，高效液相色谱分析的参数为，色谱柱：Thermo Fisher，Hypersil Gold aQ，150×4.6mm，3μm；柱温：30℃；流动相：水相为含0.1％甲酸的去离子水，有机相为甲醇；梯度洗脱：0min时，95％水相+5％有机相，30min时，5％水相+95％有机相；流速：0.3mL/min；进样量：10μL；波长：284nm。