[发明专利]EGFR和HER2基因突变检测试剂盒、检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种EGFR和HER2基因突变检测试剂盒，其包括：EGFR突变检测试剂，其包括EGFR基因外显子18、19、20、21特异性引物及dNTP溶液，所述特异性引物为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2；HER2突变检测试剂，其包括HER2基因外显子20特异性引物及dNTP溶液，所述特异性引物为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4。本发明还公开了一种利用EGFR和HER2基因突变检测试剂盒检测EGFR和HER2基因突变的方法，EGFR和HER2基因突变检测试剂盒的应用，该试剂盒用于检测与肺癌及其他癌症相关的EGFR和HER2基因突变。本发明快速准确、操作简便。

技术领域

本发明涉及一种EGFR和HER2基因突变检测试剂盒、检测方法及其应用，属于基因突变检测技术领域。

背景技术

肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。根据各型肺癌的分化程度和形态特征，目前将肺癌分为两大类，即小细胞肺癌和非小细胞肺癌，后者包括鳞癌、腺癌和大细胞癌。其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）占肺癌的85%以上，而且大部分就诊时已属晚期。

近年来在NSCLC的治疗上，化疗的地位虽然没有发生根本动摇，但其疗效已达到一个平台，毒性及不良反应也限制了临床应用。靶向治疗因其可靠的疗效且毒性和不良反应轻，已成为最受关注和最有前途的治疗手段之一。目前国内外已经上市的靶向治疗药物针对的主要靶点包括EGFR、HER2、K-Ras、B-Raf、PIK3CA、ALK融合基因和ROS-1融合基因、c-Met、VEGF等。

EGFR、HER2都是ErbB家族受体酪氨酸激酶，表达于正常上皮细胞表面，而在一些肿瘤细胞中常过表达，EGFR、HER2的过表达和肿瘤细胞的转移、侵润、预后差相关。其下游的信号转导通路主要有两条：一条是Ras/Raf/MEK/ERK-MAPK通路，而另一条是 PI3K/Akt/mTOR通路。当信号传导至细胞核后，引起核内基因转录水平的增加，从而导致细胞增殖、转化。

大量研究结果表明，EGFR基因突变状态是EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）治疗晚期NSCLC最重要的疗效预测因子。突变通常发生于外显子18~21，其中19外显子缺失及21外显子L858R点突变是最常见的对EGFR-TKI治疗敏感的突变（EGFR敏感突变）。在非选择性中国NSCLC患者中，EGFR总突变率约为30%，腺癌患者突变率约为50%，不吸烟腺癌可高达60%~70%，而鳞癌患者仍有约10%的EGFR敏感突变率。

在13%~20%的NSCLC患者中，存在HER2的过表达，HER2基因的突变，主要包括外显子20的772、776、778位发生突变，存在于大约1%~4%的NSCLC患者中，研究显示，HER2的突变可能比其过表达与NSCLC的发病机制更加相关，HER2的过表达和EGFR外显子20的T790M位点突变被认为是抵抗EGFR酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor，TKI）治疗的潜在机制。

目前对于EGFR和HER2基因突变状态的检测主要有实时定量PCR法、Sanger测序法和二代测序。实时定量PCR法操作复杂，针对每种突变必须有相匹配的引物，因此鉴定上述突变需要10对以上的引物才可以完成；而且只能检测已知的突变，如果有未知突变，实时定量PCR法难以给出结果；同时实时定量PCR法的检测仪器和实验试剂价格比较昂贵，总的费用较高。二代测序虽然可以一次读取EGFR和HER2的所有突变，但是二代测序的价格为数千元到万元，数据处理复杂，周期较长，一般患者难以接受，满足临床用药和检测诊断方面的时效性要求。相比之下，Sanger测序法最为经济，操作简单，技术成熟；但是，以往的测序引物和方法并未涵盖最新的突变位点和扩增区域，限制了该方法的应用。

发明内容