[发明专利]一种CPSP动物模型的建立方法及应用

说明书

本发明涉及一种CPSP动物模型的建立方法及应用，属于动物模型构建技术领域。本发明的建立方法包括将0.1‑0.3U的VII型胶原酶注射入鼠脑的右侧丘脑腹后外侧核区，即得。本发明采用经大鼠背侧丘脑腹后外侧核立体定位注射VII胶原酶建立丘脑痛的模型，通过检测机械痛、热痛、冷痛、双足平衡痛评价中枢神经病理性痛丘脑痛的疼痛特征；采用矿场实验评价焦虑的情绪反应，强迫游泳和糖水实验评价抑郁的状态；免疫荧光和免疫印迹评价神经炎症反应的发生变化情况；透射电镜解析超微结构变化，筛选CPSP动物模型并评价立体定位注射VII胶原酶脑出血后丘脑痛的行为学特征及发生发展的神经生物学机制。

技术领域

本发明涉及一种CPSP动物模型的建立方法及应用，属于动物模型构建技术领域。

背景技术

自发性脑出血(intracerebral hemorrhage，ICH)具有高发病率、高死亡率和高致残率的特点，占脑卒中的15％～20％，死亡率高达40％。丘脑出血约占脑出血的13％～30％。据报道，至少11-32％的中风患者出现卒中后疼痛(Central post-stroke pain,CPSP)，CPSP的疼痛是脑卒中病人的常见症状之一，是最难忍受、最顽固、最难治疗的病症。研究表明CPSP以延髓梗死和丘脑出血比例更高，丘脑腹后核和背核分别占3.2％和25％，丘脑腹后核VPL在中枢痛发挥至关重要的作用。CPSP可能在毫无征兆的情况下发生，自发性疼痛可能会连续或间歇的疼痛，严重影响病人生活质量。

因此，丘脑痛是一种发作性、有时呈持续性顽固性疼痛的综合征，又称丘脑疼痛综合征，系丘脑病损综合征的主要临床表现之一，属于中枢痛。CPSP表现为持续或间歇性的烧灼痛、跳痛、酸麻痛、搏击样或撕裂样疼痛、触摸痛以及痛觉过敏，疼痛发生在受影响侧的肢体或躯干，引起疼痛的脑损伤部位50％集中在丘脑，发生率为卒中病人的8％-35％，多发生于卒中后6个月或者更早期阶段。疼痛多为自发或者诱发痛，会被各种各样的刺激所加重如运动、触摸、温度的改变(尤其是冷刺激)以及压力等。临床研究提示一侧丘脑损伤，对侧肢体可出现严重的慢性疼痛，机械性痛觉过敏，痛觉超敏，冷痛敏表现异常明显，病人情绪亦会受到影响，表现为焦虑和抑郁等情绪改变。针对中枢痛的临床治疗方法有药物治疗(包括抗抑郁药，抗癫痫药，阿片类药物等)，皮层刺激及深部脑刺激等，但是确切效果并不理想。究其原因可能是目前的药物对于CPSP并没有针对性的药效，而CPSP动物模型的缺乏又使得这些针对性药物的筛选变得更为困难。

脑卒中后中枢痛在脑卒中患者中的发生率只占8％，但其中50％为丘脑卒中。而且由于脑卒中本身发病率高、基数大，丘脑痛的发病率不可小视，因此迫切需要研究丘脑痛的有效治疗方法和手段。但是由于目前对脑出血的机制并不完全清楚，尤其是疼痛的发生及发展的机制研究报道甚少，且目前没有发现特别有效的治疗方案，因此，阐明ICH后CPSP的发病机制、找到新的治疗靶点和有效药物是目前ICH研究的首要目标。

动物模型是研究发病机制和临床防治的基础，同时也是研究的一个难点。如何建立一种简单、快捷且重复性好又与人类脑出血接近的中重度脑出血模型是出血性脑血管疾病研究的一个重要课题。目前常用的脑出血动物模型有：胶原酶诱导法、自体血注入法、微球囊充胀法和自发性脑出血。自体血注入法会出现血液沿针道反流、血肿破入脑室或溢到硬膜下，同时存在血肿形态不一的缺陷。通过胶原酶诱导制作脑出血模型方法简单、快捷且重复性好，而且与人类脑出血病理、生化和病理生理学有许多相似之处。

胶原酶是一种金属酶，能破坏组织中血管基底膜及细胞间基质中的胶原蛋白，使血管壁受损引起血液外渗。《VII型胶原酶诱导大鼠脑出血模型研究》(倪厚杰等，神经损伤与功能重建2012，7(6)：411-412)中公开了一种VII型胶原酶诱导的脑出血模型，获得成功，但该模型神经行为学受到影响，与临床上CPSP的症状并不相同，不能用于研究CPSP的发病机制及筛选有效药物，目前尚未出现较好的构建CPSP动物模型的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种CPSP动物模型的建立方法。