[发明专利]一种用于检测氯吡格雷个体化用药相关的基因多态性位点的核酸质谱检测试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种检测15个与氯吡格雷个体化用药相关的基因多态性位点的引物系统。基于该引物系统所制备的产品，能实现同时对与氯吡格雷个体化用药相关的15个基因多态性位点进行检测。使用该产品，对氯吡格雷服用者在15个基因多态性位点的基因型进行检测，检测结果结合其他临床指标，可为临床医师合理利用氯吡格雷提供参考，切实推进氯吡格雷个体化用药，降低不良反应的发生率。本发明能在一个反应体系中对不同基因上的15个基因多态性位点同时进行检测，较测序、实时荧光定量PCR等技术成本更低，结果准确，操作更简便，同时，对于患者而言，节省了检测费用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于确定氯吡格雷个体化用药相关的基因多态位点的检测方法及产品，具体而言是利用多重PCR技术、单碱基延伸技术和质谱技术，对氯吡格雷个体化用药相关的15个基因多态性位点进行检测的方法及相应的试剂盒。

背景技术

氯吡格雷是一种噻吩并吡啶类化合物，它能不可逆地抑制血小板聚集，其作用机理是选择性抑制位于血小板表面的、与腺苷酸环化酶偶联的ADP受体，进而抑制纤维蛋白原与血小板的结合，从而阻止了血小板聚集。

氯吡格雷是最广泛使用的抗血小板聚集药物之一，可抑制动、静脉内血栓形成，或使形成的血栓的体积减小，并抑制血小板脱颗粒反应，用于预防和治疗因血小板高聚集引起的心、脑及其他动脉循环障碍疾病。氯吡格雷可延长出血时间，它有防止动脉粥样硬化病人的缺血性中风、心肌梗死和血管性死亡的作用。据统计，临床在使用氯吡格雷时，多达30％的患者未能达到预期药效。造成氯吡格雷药效的个体差异的原因很多，可分为非遗传因素和遗传因素。非遗传因素主要有体重、高密度脂蛋白和甘油三酯水平、药物的相互作用以及合并疾病等。近年的研究表明，遗传因素在氯吡格雷药效的个体差异的表现中起到一定的作用。影响氯吡格雷药效的个体差异的遗传因素是指与氯吡格雷的药动学和药效学有关的蛋白或酶的基因发生变异，影响蛋白的表达或酶的活性，从而增强或降低氯吡格雷的疗效，使不同个体间的用量产生差异，这些遗传因素包括CYP2C19、CYP2C9、IRS1、P2RY12、PON1、CES1等基因上的基因多态性位点。

氯吡格雷为前体药，需经肝细胞色素P450酶系主要是CYP2C19和CYP2C9代谢生成活性代谢产物，发挥抗血小板疗效。CYP2C19基因存在多态性，其酶有三种不同的代谢类型：快速代谢型（UM，*17/*17）、中间代谢型(IM，*1/*2,*1/*3,*17/*2,*17/*3）、慢代谢型(PM，*2/*2,*2/*3,*3/*3）。常规剂量的氯吡格雷，在慢代谢型患者中产生的活性代谢物减少，抑制血小板聚集作用下降，形成血栓风险增加；在快代谢型患者中产生活性代谢物增加，抑制血小板聚集作用增强。还有研究表明，基因型为CYP2C19*8与一个功能缺失等位基因*2，*3，*4，*5，*8或功能等位基因*1结合的个体相比于基因型为*1/*1的个体，对氯吡格雷的代谢活性弱，同时会降低活性药物代谢物的形成，对氯吡格雷的反应较弱，发生心血管二次事件的风险较高。CYP2C9酶功能缺失的*2和*3突变，降低了氯吡格雷的体内代谢和抗血小板活性。

临床中应用常规剂量的氯吡格雷，有部分患者不能达到预期的抗血小板的目的，导致不良心血管事件的发生，这种现象称为氯吡格雷抵抗。IRS1rs13431554位点GG基因型与冠心病合并Ⅱ型糖尿病患者氯吡格雷抵抗的发生呈明显相关性，GG基因型是冠心病合并Ⅱ型糖尿病患者氯吡格雷抵抗的独立危险因素。PON-1是由肝脏合成的糖蛋白，在人体组织中广泛分布。有研究发现，PON-1是氯吡格雷代谢物形成活性硫醇基的限速酶，PON-1基因的Q192多态性影响氯吡格雷活性代谢物的形成速率。近年来研究发现CES1是氯吡格雷转化为活性代谢产物过程中又一种重要的酶，CES1的SNP位点G143E与氯吡格雷活性代谢物水平升高有关。冠心病并发Ⅱ型糖尿病患者中，IRS1基因多态性位点rs13431554GG型个体在接受氯吡格雷治疗时，有较高的血小板反应性。P2RY12受体是氯吡格雷的作用靶点，在ADP诱导的血小板聚集中发挥重要的作用，P2RY12基因多态性位点rs6785930、rs3732759、rs2046934与氯吡格雷的反应性及发生不良心血管事件的风险相关。