[发明专利]一种从川楝子中制备Gli基因抑制剂大戟烷型三萜的方法

说明书

本发明公开了一种从川楝子中制备Gli基因抑制剂大戟烷型三萜的方法，包括：步骤S1，溶剂提取：川楝子用50‑95％乙醇提取，过滤、浓缩；步骤S2，树脂富集：浓缩液上样于AB‑8大孔树脂，先用30％乙醇洗脱10‑14个柱体积，再用65％乙醇洗脱，收集第7‑9个柱体积洗脱液，浓缩至干；步骤S3，分子垂钓：将步骤S2所得富集产物用垂钓试剂提取，提取液过滤后用二氯甲烷提取，静置、沉淀，收集上清液，浓缩至干；其中，所述垂钓试剂为氯化胆碱与氯化锌按照摩尔比1:3形成的低共熔溶剂；步骤S4，高速逆流：以体积比为4:6:3:7的石油醚‑乙酸乙酯‑甲醇‑水作为溶剂系统，根据色谱图收集对应洗脱峰。本发明提供的方法制备的Meliasenin B、C和D纯度高，适于工业生产。

技术领域

本发明属于化学领域，涉及天然产物的制备方法，具体涉及一种从川楝子中制备Gli基因抑制剂Meliasenin B、C和D的方法。

背景技术

Meliasenin B、C和D是从川楝子中分离得到的三种大戟烷型三萜(参考文献：LimonoidsandTriterpenoids from the StemBark ofMeliatoosendan,J.Nat.Prod.2010,73,664-668)。

目前，没有关于Meliasenin B、C和D的药理活性和医药用途报道。但是，却有研究表明川楝子中包括但不局限于Meliasenin B在内的化合物与川楝子的肝毒性相关(参考文献：川楝子中肝毒性成分的快速筛查研究，中国中药杂志，2013年6月第38卷第11期)。

项目组在筛选治疗肝癌的化合物时发现，Meliasenin B、C和D具有抗肝癌的活性，明确了其分子机制，研究了这三种化合物对正常肝细胞的毒性，并提供了减毒方法(已申请专利)。

但是，传统的分离制备Meliasenin B、C和D单体的方法需要反复使用硅胶柱层析，而反复硅胶柱层析是很难工业化应用的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从川楝子中制备Gli基因抑制剂Meliasenin B、C和D的方法。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种从川楝子中制备Meliasenin B、C和D的方法，包括如下步骤：

步骤S1，溶剂提取：将川楝子粉碎，50-95％乙醇提取，提取液过滤、浓缩至无醇味；

步骤S2，树脂富集：将步骤S1所得浓缩液上样于AB-8大孔吸附树脂，先用30％乙醇洗脱10-14个柱体积，再用65％乙醇洗脱，收集第7-9个柱体积洗脱液，浓缩至干；

步骤S3，分子垂钓：将步骤S2所得富集产物用垂钓试剂提取，提取液过滤后用3-5倍体积的二氯甲烷提取，静置、沉淀，收集上清液，浓缩至干；其中，所述垂钓试剂为氯化胆碱与氯化锌按照摩尔比1:3形成的低共熔溶剂；

步骤S4，高速逆流：将步骤S3所得浓缩物用高速逆流色谱分离，以体积比为4:6:3:7的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水作为溶剂系统，上相作为固定相，下相作为流动相，根据色谱图收集Meliasenin B、C和D对应的洗脱峰。

优选地，步骤S1提取溶剂为70％乙醇。

优选地，步骤S1提取的料液比为1:30。

优选地，步骤S2先用30％乙醇洗脱12个柱体积。

优选地，步骤S3富集产物提取时的料液比为1:5。

优选地，步骤S3过滤后用4倍体积二氯甲烷提取。

优选地，步骤S4流动相流速为2mL/min，检测波长225nm，分离温度25℃，转速850r/min。