[发明专利]沉默程序性死亡受体-配体表达的siRNA序列及其应用

说明书

本发明公开了一类沉默程序性死亡受体‑配体表达的siRNA序列，是指能够沉默人程序性死亡受体‑配体1的六种核苷酸序列中的任意一种，尤其是靶序列为GTAGTAGATGTTACAATTT或者GGATAAGAACATTATTCAA时的沉默效果最好。本发明能够有效降低肿瘤细胞表面的PD‑L1/CD274蛋白的表达水平，促进T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤，从而抑制肿瘤生长。本发明可以用于设计和制备预防、治疗多种癌症的核酸药物。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种沉默基因或蛋白质表达的siRNA序列及其应用。

背景技术

小干扰RNA（siRNA）可特异性沉默靶标mRNA表达水平（2006年诺贝尔生理医学奖），因此siRNA分子可以通过特异性沉默引起或促进疾病发生或发展的基因，具有治疗基因过表达及基因突变引起的疾病的应用前景（Science,2016,352(6292):1417-1420；Nat ChemBiol,2006,2(12):689-700.）。自2004年始美国FDA已批准20多种siRNA分子药物制剂进入了临床试验，其中有近10项III期临床试验方案在进行。2017年9月，美国Alnylam公司（www.alnylam.com）率先宣布其针对甲状腺素运载蛋白(Transthyretin，TTR)的siRNA药物Patisiran在一个家族性淀粉样多发性神经病变（FAP）三期临床达到一级、二级终点，这是siRNA药物首次在三期临床达到主要临床终点，这意味着siRNA药物即将上市进入临床应用。

在基因DNA双链中，转录时作为mRNA（信使RNA，携带遗传信息，在蛋白质合成时充当模板的RNA）合成模板的那条单链叫做模板链或反义链，而转录时不能作为mRNA合成模板的那条单链叫有义链或正义链。在siRNA双链中，能与Argonaute蛋白（AGO蛋白）组成RNA干扰沉默复合物（RISC）的那条单链称为反义链（Antisense strand）或向导链（Guidestrand），该链形成的RISC复合物能与靶mRNA结合，切割并沉默靶mRNA。而另外一条无功能的单链称之为正义链（sense strand）或过客链（Passenger strand）。利用siRNA分子的特征，可以设计多条沉默靶基因的siRNA序列（Nature Reviews Genetics,2015,16(9):543-552.）。

PD-L1/CD274全称为程序性死亡受体-配体1（programmed cell death-Ligand1），是大小为40kDa的跨膜蛋白，在大多数肿瘤中存在表达。正常情形下免疫系统会对聚集在淋巴结或脾脏的外来抗原产生反应，促进具有抗原特异性的T细胞增生。而T细胞表面的程序性死亡受体-1（PD-1）与程序性死亡受体-配体1（PD-L1）结合，可以传导抑制性的信号，减低T细胞的增生。在肿瘤发生时，肿瘤细胞表面的PD-L1/CD274表达上调，与T细胞表面的PD-1受体相互作用，抑制T细胞的活化与增殖，从而产生肿瘤免疫逃逸（Immunotherapy，2016(8), 479-488.）。因此，设计小分子抑制剂或抗体抑制PD-1或PD-L1通路，从而利用机体T细胞直接杀灭肿瘤细胞，已成为肿瘤免疫疗法的热点。截止到2017年10月底，针对PD-1靶点的药物分别是百时美施贵宝（BMS）公司的Nivolumab（商品名Opdivo）；由默沙东公司的Pembrolizumab（商品名Keytruda）。针对PD-1靶点的药物分别是罗氏公司的Atezolizumab（商品名Tecentriq）；德国默克公司与辉瑞公司共同研发的Bavencio（商品名Avelumab）；阿斯利康公司的Durvalumab，（商品名Imfinzi）。

国际公布号为WO2017190695A1公布的一种抑制EGFR基因表达的siRNA，仅仅能够抑制EGFR基因表达，不能抑制程序性死亡受体-配体的表达。

专利申请号为2015800670256的具有人源化分化族274基因的非人动物，提供了非人动物、用于制备和使用所述非人动物的方法和组合物，其中所述非人动物包含分化簇274(CD274)基因的人源化。