[发明专利]高效表达分泌β-甘露聚糖酶的重组枯草芽孢杆菌菌株及其获得方法

权利要求书

1.经密码子优化的β-甘露聚糖酶基因，其特征在于(I)或(II)：

(I)SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

(II)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经过1-20个，优选1-10个，更优选1-5个，最优选1个核苷酸的取代、缺失或添加而获得的核苷酸序列，且获得的核苷酸序列编码蛋白具有β-甘露聚糖酶的活性。

2.一种表达载体，其特征在于，包括权利要求1所述的β-甘露聚糖酶基因。

3.权利要求2所述的表达载体，其特征在于，还包括编码信号肽的核酸片段；

优选的，所述的信号肽为amyL，或lipA，或nprB，或nprE，或phoD，或ywbN，更优选的，所述的信号肽为lipA；

优选的，所述的编码信号肽的核酸片段的3’端与β-甘露聚糖酶基因的5’端相连。

4.权利要求2或3所述的表达载体，其特征在于，还包括启动子；

优选的，所述的启动子为hpaII，或P43，或aprE，或xyl，或grac，或mglv，更优选的，所述的启动子为mglv；

优选的，所述启动子的3’端与编码信号肽的核酸片段的5’端相连。

5.一种表达分泌β-甘露聚糖酶的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌包括权利要求2-4所述任一的表达载体。

6.权利要求5所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，还包括选自SecY、SecE、SecG、SecYEG、SecDF、SecA、Ffh、Scr、Hbs、SRP、SipS、SipT、SipU、SipV、SipW、dnaK/J、GroESL、FtsY和PrsA中的一种或多种核酸片段，优选的为GroESL核酸片段。

7.权利要求6所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的蛋白分泌限制因子核酸片段插入重组枯草芽孢杆菌的基因组中，优选的，所述蛋白分泌限制因子核酸片段插入重组枯草芽孢杆菌的基因组的amyE位点。

8.权利要求5-7所述任一的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的枯草芽孢杆菌为Bacillus subtilis 1A751。

9.一种β-甘露聚糖酶的生产方法，其步骤在于：

(a)构建权利要求5-8所述任一的重组枯草芽孢杆菌；

(b)培养步骤(a)得到的重组枯草芽孢杆菌；

(c)收集β-甘露聚糖酶；

优选的，所述培养的培养基为2×SR培养基；

优选的，所述培养的培养温度为30-40摄氏度，更优选的培养温度为37摄氏度；

优选的，所述培养的培养时间为12-80h，优选的培养时间为72h。

10.权利要求1的β-甘露聚糖酶基因，或权利要求2-4所述任一的表达载体，或权利要求5-8所述任一的重组枯草芽孢杆菌，或权利要求9所述生产方法生产的β-甘露聚糖酶在食品、饲料和造纸中的应用。