[发明专利]原发性胆汁性肝硬化的诊断试剂盒及相关基因在制备该试剂盒中的应用

说明书

本发明提供了一种用于诊断原发性胆汁性肝硬化的基因标志物及其试剂盒，利用所述基因标志物可以快速、有效的诊断原发性胆汁性肝硬化。

技术领域

本发明属于疾病研究领域，具体涉及原发性胆汁性肝硬化(PBC)的诊断标志物及其试剂盒的开发。

背景技术

原发性胆汁性肝硬化(PBC)又名原发性胆汁胆管炎，是一种慢性肝内胆汁淤积性疾病。患者肝内汇管区大量CD4⁺和CD8⁺为主自身反应性淋巴细胞浸润，导致非化脓性胆管炎，伴随外周血清中出现高滴度抗线粒体抗体(AMA)、胆汁淤积相关的生化指标升高，并有外周血淋巴细胞亚群和多种细胞因子的变化，因而免疫系统异常在PBC发病中具有重要作用，但其机制尚不完全清楚。我国报道的PBC病例数呈不断上升趋势，但尚缺乏系统的流行病学调查。上海、广州及贵州学者在当地健康体检人群中通过筛查AMA的M2亚型(AMA—M2)及进一步检查，推算出PBC在人群中的患病率为49.2/10万～99.78/10万。这些报道提示，我国PBC的患病率并不低于国外，需要引起重视。

PBC的发病机制尚不完全清楚。目前认为遗传背景和环境因素相互作用导致了免疫耐受丧失，从而启动了针对肝内胆管上皮细胞的自身免疫反应。PBC的遗传易感性研究在欧洲及北美地区显示出较高的一致性，而在亚洲包括日本和中国进行的研究一致性不高。这说明PBC的发病可能存在种族差异，也可能与地域环境因素的不同有关，提示需进一步探讨遗传与环境因素相互作用在本病发生发展中的意义。近，我国学者对南方(主要是上海和江苏)汉族PBC患者进行了研究，发现早前欧美及日本报道的14个与PBC相关的单核苷酸多态性位点中，有7个与中国PBC患者相关。这些资料提示，我国PBC患者的遗传易感性与欧美及日本既存在共性，也存在差异。

早期诊断和治疗是控制PBC疾病发展的最有效手段。目前对PBC的治疗缺少有效的办法，熊去氧胆酸是唯一对早期PBC患者(尤其是黄疸没有出现的患者)进行有效控制的药物，但无治愈作用，而挽救晚期PBC患者的唯一手段是实施肝脏移植。我国是病毒性肝炎高发的国家，PBC的临床症状与病毒性肝炎相似，PBC患者早期常被误诊为病毒性肝炎或药物性肝炎，严重影响了PBC患者的诊疗。因此，对PBC患者进行早期的有效诊断，具有重要的社会意义。

我们利用高通量转录组测序筛选与PBC密切相关的基因，不仅有利于研究PBC的发生和发展的病理机制，而且能为诊断和治疗PBC提供新的诊断标志物或新的药物靶点。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可用于PBC疾病诊疗的标志物基因。相比传统的PBC疾病的诊断和治疗方法，使用基因标志物来诊断和治疗PBC疾病具有及时性、特异性和无创性。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

提供一种诊断原发性胆汁性肝硬化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含通过检测受试者外周血中PELI2基因、ZNF264基因和CDK15基因的表达水平来判断受试者是否患有原发性胆汁性肝硬化的试剂。

优选地，所述试剂包括用RT-PCR、实时定量PCR或基因芯片诊断原发性胆汁性肝硬化的试剂。

所述用于RT-PCR或实时定量PCR的试剂为如下引物：

PELI2：正向引物为5’-CACTGCGCCCCCAATAAGG-3’(SEQ ID NO：1)；

反向引物为5’-GTTCTCCAGAGGAGAGTGGC-3’(SEQ ID NO：2)；

ZNF264：正向引物为5’-AGTCATGGTTCTCTGGTGGTTT-3’(SEQ ID NO：3)；

反向引物为5’-GAAGCCCTCCTGTAGCTGTC-3’(SEQ ID NO：4)；