[发明专利]自身免疫性肝炎的诊断试剂盒及相关基因在制备该试剂盒中的应用

说明书

本发明提供了一种用于诊断自身免疫性肝炎(AIH)的基因标志物及其试剂盒，利用所述基因标志物可以快速、有效的诊断自身免疫性肝炎(AIH)。

技术领域

本发明属于疾病研究领域，具体涉及自身免疫性肝炎(AIH)的诊断标志物及其试剂盒的开发。

背景技术

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)是一种由异常自身免疫反应介导的慢性炎症性肝脏疾病，以血清自身抗体阳性、转氨酶水平和免疫球蛋白G水平升高、组织学上表现为界面性肝炎为临床特点。一般而言，AIH患者对免疫抑制剂应答良好，然而如不治疗可进展为肝硬化、肝功能衰竭。目前，尚缺乏我国AIH流行病学确切的资料。近年来，随着对AIH诊断和认识水平的不断提高，我国AIH患者检出率逐年升高。AIH已成为非病毒性肝病的重要组成部分，日益受到人们的关注。

AIH的病因和发病机制尚未完全阐明，并发症和伴发病多，尚无特效治疗，病程经过呈慢性、波动性。前瞻性研究显示，未经治疗的严重AIH患者在诊断后半年内的死亡率高达40％，幸存者中有40％发展为肝硬化，54％的患者在肝硬化2年内出现食管静脉曲张，最终有20％的患者死于食管静脉曲张破裂引起的大出血。因此及时诊断，并给予合理恰当的治疗，对于延缓或逆转此病有非常重要的意义。AIH 的诊断有一定难度，需要有特征性表现的存在，易导致漏诊或误诊；同时需要排除其他的情况，特别是病毒性肝炎。而诊断为病毒性肝炎的也不乏其人，特别是急性起病时，更易误诊随着丙型病毒性肝炎的被证实，增加了AIH诊断的不确定性。丙肝患者常常表现出与AIH相似的特征。

近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，从遗传易感性的角度来阐述AIH的发病机制逐渐成为研究的热点。人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)是已知的最重要的AIH遗传风险因子。 HLA区域和AIH的相关性在不同地区和人群中被广泛研究，是目前证据最确凿的易感基因。

我国AIH遗传学研究尚处于起步阶段，与西方国家研究水平存在较大差距。在中国人群中开展全基因组、大样本、反复验证的遗传学研究具有重要意义，不但有助于发现新的、中国人群特异的AIH易感基因，还可为进一步揭示疾病的发病机制和个性化诊疗提供依据。我们利用高通量转录组测序筛选与AIH密切相关的基因，不仅有利于研究AIH的发生和发展的病理机制，而且能为诊断和治疗AIH提供新的诊断标志物或新的药物靶点。

发明内容

为了弥补现有技术中自身免疫性肝炎(AIH)缺乏特异性的临床表现及生化指标、在临床工作中诊断存在一定困难的缺陷，本发明提供一种可用于AIH疾病诊疗的标志物基因。相比传统的AIH疾病的诊断和治疗方法，使用基因标志物来诊断和治疗AIH疾病具有及时性、特异性和无创性。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

提供一种诊断自身免疫性肝炎(AIH)的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含通过检测受试者外周血中KCNIP2基因、C16orf54基因和IL21基因的表达水平来判断受试者是否患有自身免疫性肝炎的试剂。

优选的，所述试剂包括用RT-PCR、实时定量PCR或基因芯片诊断自身免疫性肝炎的试剂。

所述用于RT-PCR或实时定量PCR的试剂为如下引物：

KCNIP2：正向引物为5’-GACAGTTCGCTCCCTTCAG-3’(SEQ ID NO：1)；

反向引物为5’-CCCCGAAGAATCACGGACA-3’(SEQ ID NO：2)；

C16orf54：正向引物为5’-CCAGAGCCACAAATCCTGT-3’(SEQ ID NO：5)；

反向引物为5’-TAGGACAACGCTCCTCTCCA-3’(SEQ ID NO：6)；