[发明专利]一种硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法

权利要求书

1.一种硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法，其特征在于：在产谷氨酰胺转氨酶的菌株培养过程中添加含硒物质。

2.根据权利要求1所述的硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法，其特征在于，所述产谷氨酰胺转氨酶的菌株包括茂原链轮丝菌、吸水链霉菌和经过基因工程改造的细菌、放线菌、霉菌和酵母。

3.根据权利要求2所述的硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法，其特征在于，所述产谷氨酰胺转氨酶的菌株是茂原链轮丝菌和吸水链霉菌。

4.根据权利要求1所述的硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法，其特征在于，所述含硒物质包括富硒酵母、淀粉-硒纳米颗粒、硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和亚硒酸钠。

5.根据权利要求1-4任一所述的硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法，其特征在于，以所述产谷氨酰胺转氨酶的菌株为出发菌株，依次经过(1)试管斜面种子培养阶段、(2)平皿培养阶段、(3)种子摇瓶培养阶段、(4)种子罐培养基阶段和(5)发酵罐培养阶段，在所述(1)～(5)中至少一个阶段中添加含硒物质。

6.根据权利要求5所述的硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法，其特征在于，在所述(1)中，将经过活化、筛选的产谷氨酰胺转氨酶的菌株的单菌落接种在斜面种子培养基上，30-40℃培养40-56h,获得培养成熟的试管斜面种子，在所述斜面种子培养基中添加5～20mg/L的亚硒酸钠或者用淀粉-硒纳米颗粒代替淀粉，所述斜面种子培养基是高氏一号培养基或经过改良的高氏一号培养基。

7.根据权利要求5所述的硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法，其特征在于，在所述(2)中，将所述培养成熟的试管斜面种子经划线分离培养，挑选单菌落形成孢子悬浮液，将所述孢子悬浮液接种平皿培养基上，30-40℃培养40-48h，获得菌苔，在所述平皿培养基中添加5g/L的富硒酵母代替5g/L的淀粉，所述平皿培养基是高氏一号培养基或经过改良的高氏一号培养基。

8.根据权利要求5所述的硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法，其特征在于，在所述(3)中，将所述菌苔摇匀打碎，接种到种子摇瓶培养基中，在30-40℃、200-300r/min条件下培养36-44h,获得摇瓶种子液，在所述种子摇瓶培养基中添加5～20mg/L的亚硒酸钠，或者用富硒酵母代替蛋白胨和酵母膏，或者用淀粉-硒纳米颗粒代替淀粉，所述种子摇瓶培养基包括20g/L的蛋白胨、25g/L的淀粉、2g/L的酵母膏、2g/L的MgSO₄、2g/L的K₂HPO₄、2g/L的KH₂PO₄，调节pH至7.0。

9.根据权利要求5所述的硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法，其特征在于，在所述(4)中，将所述摇瓶种子液接种到种子罐培养基中，在30-40℃、200-300r/min条件下培养18-40h,得到种子罐种子液，所述种子罐培养基中用富硒酵母代替蛋白胨和酵母膏，同时用淀粉-硒纳米颗粒代替淀粉，所述种子罐培养基包括20g/L的蛋白胨、25g/L的淀粉、2g/L的酵母膏、2g/L的MgSO₄、2g/L的K₂HPO₄、2g/L的KH₂PO₄，调节pH至7.0。

10.根据权利要求5所述的硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法，其特征在于，在所述(5)中，选取所述(4)中培养18-20h、菌球均匀，菌数大于等于10⁴个/ml的种子罐种子液，以10～15％接种量接种在发酵培养基中，在28～40℃，搅拌速度230-300r/min下发酵培养50～70h，得到发酵液，所述发酵液经提取、纯化、精制和冻干，得到酶粉，所述发酵罐培养中流量添加1L/m³的硒代半胱氨酸或硒代蛋氨酸，或者在所述发酵罐培养基中用富硒酵母代替蛋白胨和酵母膏同时用淀粉-硒纳米颗粒代替淀粉，所述发酵罐培养基包括20g/L的蛋白胨、25g/L的淀粉、2g/L的酵母膏、2g/L的MgSO₄、2g/L的K₂HPO₄、2g/L的KH₂PO₄、占所述发酵罐培养基体积0.01％的PPE消泡剂、占所述发酵罐培养基质量分数0.01％的聚甘油醚，调节pH至7.0。