[发明专利]快速检测微生物的方法

说明书

本发明涉及微生物检测领域，公开了一种快速检测微生物的方法。所述方法包括以下步骤：1)将待测样品进行前处理，以得到pH值为6.4‑7.4的液体形式的待测样品；2)将免疫磁珠与所述液体形式的待测样品混合，混合的条件使得当待测样品中存在目标菌时，免疫磁珠能够特异性地结合目标菌，以得到含有免疫磁珠‑目标菌复合体的混合物；3)将步骤2)得到的混合后的物料进行第一磁分离，以得到含有所述免疫磁珠‑目标菌复合体的第一聚集物，并去除未结合在免疫磁珠上的物质；4)将步骤3)得到的第一聚集物进行重悬，以得到重悬液；5)将步骤4)得到的重悬液进行化学发光检测。本发明实现了对样品中的目标菌进行快速、准确检测的目的。

技术领域

本发明涉及微生物检测领域，具体涉及一种快速检测微生物的方法，特别是(非诊断目的地)检测样品中痕量微生物的方法。

背景技术

食品安全是重大民生问题。食源性微生物致病菌有效的监测对于食品质量控制和监管尤为重要。针对食品中的病原微生物(如细菌、真菌和病毒等)以及其他有害生物(如寄生虫)，传统的检测方法为分离培养法。分离培养需要前增菌、生化鉴定或血清学鉴定，整个检测过程需要2-3天甚至5-6天的时间才能完成，而且检测过程中所需的培养基准备、平板培养、菌落计数、生化鉴定等使得检测任务劳动强度大，耗时，不能及时、快速评价食品中微生物的安全性，不利于监管部门对问题食品的快速反应。传统检测病原微生物方法步骤多，所需时间长，速度慢，难以适应食品快速流通检测的需要。食源性致病菌的实际检测普遍面临复杂食品成分、高浓度杂菌的干扰，准确检出含量低且分布不均匀的目标菌的技术瓶颈。食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、克罗诺杆菌的数量一般较少(小于10CFU/g)且占样品中全部微生物的比例较小(一般小于1％，国家标准允许10³-10⁵CFU/g的非致病微生物存在于食品中)。然而，现有的检测微生物(特别是沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、克罗诺杆菌等)的方法的检出限往往较高，且存在假阳性或假阴性检测结果。例如，目前采用化学发光免疫分析方法检测沙门氏菌的检出限一般为10⁵-10⁶CFU/mL。

因此，十分有必要寻找新的快速、准确且具有较低的检出限的检测样品(特别是食品样品)中微生物的方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种(非诊断目的)检测微生物的方法，使用该方法对样品中的微生物进行检测时，可以快速、准确地检测出样品中的目标菌，并且检出限较低，从而有效地避免了漏检的风险。

为了实现上述目的，本发明提供了一种(非诊断目的地)快速检测微生物的方法，该方法包括以下步骤：

(1)将待测样品进行前处理，以得到pH值为6.4-7.4的液体形式的处理后样品；

(2)将免疫磁珠与所述液体形式的处理后样品混合，混合的条件使得当待测样品中存在目标菌时，免疫磁珠能够特异性地结合目标菌，以得到含有免疫磁珠-目标菌复合体的混合物；

(3)将步骤(2)得到的混合后的物料进行第一磁分离，以得到含有所述免疫磁珠-目标菌复合体的第一聚集物，并去除未结合在免疫磁珠上的物质；

(4)将步骤(3)得到的第一聚集物进行第一重悬，以得到第一重悬液；或

将步骤(3)得到的第一聚集物依次进行增菌培养和第二磁分离，并将第二磁分离得到的第二聚集物进行第二重悬，以得到第二重悬液；

(5)将步骤(4)得到的第一重悬液或第二重悬液进行化学发光检测，以确定待测样品中目标菌的存在。