[发明专利]一种高效的内切酶缓冲液体系

说明书

一种能提高Endo IV酶活性的内切酶缓冲液，包括20~200mM的Tris‑HCl，0.05~0.2M的NaCl，2~20mM的MgSOsubgt;4/subgt;，0.2~10mM的DTT，0.05~5质量%的表面活性剂，pH为7~8。所述缓冲液还可进一步包括0.1~5质量%的碳原子数小于5的短链醇类。

技术领域

本发明涉及酶技术领域，具体涉及一种高效的内切酶缓冲液体系。

背景技术

Endo IV(Endonuclease IV)是一种核酸内切酶，可作用于多种DNA氧化损伤，能够水解完整的脱嘌呤/脱嘧啶(AP)位点。能够切除与AP位点相连的第一个磷酸二酯键，在3’末端留下一个-OH，而在5’末端留下一个脱氧核糖5’磷酸。Endo IV酶也具有3’-二酯酶活性，可以从DNA的3’端释放出磷酸甘油醛、完整的脱氧核糖5’磷酸以及磷酸盐(DavidJ.Hosfield 1999)。Endo IV酶可应用于DNA损伤和修复研究(DempleHarrison 1994)、DNA结构研究(Hosfield et al.1999)、抗肿瘤药物研究(LevinDemple 1996)和SNP分析(Kutyavin et al.2006)。

Endo IV酶的许多实际的应用依赖于其快速高效的切除磷酸二酯键的效率，目前常用的Endo IV酶的缓冲液是NEB公司的缓冲液3，包括100mM NaCl、50mM Tris-HCl、10mMMgCl₂、1mM DTT(二硫苏糖醇)、pH 7.9(25℃)。但是，在此缓冲液体系中，Endo IV酶的切除效率比较低，切除时间在60分钟以上(Wouter Meuleman 2013)，不能满足DNA损伤的及时修复以及一些阻断基团的高效切除(Backman et al.1996)，影响了Endo IV酶在实际中的应用。

发明内容

本发明提供一种高效的内切酶缓冲液体系，通过改变酶的反应缓冲液体系，解决了Endo IV酶在现有的缓冲液中反应时间长，切除效率低的问题。

一种高效的内切酶缓冲液体系，包括20～200mM的Tris-HCl，0.05～0.2M的NaCl，2～20mM的MgSO₄，0.2～10mM的DTT，0.05～5质量％的表面活性剂，pH为7～8。

优选地，包括50mM的Tris-HCl，0.1M的NaCl，2mM的MgSO₄，2mM的DTT，1质量％的表面活性剂，pH为7.5。

优选地，上述表面活性剂选自阳离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂和两性离子型表面活性剂。

优选地，上述表面活性剂是Tween-80。

优选地，包括50mM的Tris-HCl，0.1M的NaCl，2mM的MgSO₄，2mM的DTT，1质量％的Tween-80，pH为7.5。

进一步地，还包括0.1～5质量％的碳原子数小于5的短链醇类。

优选地，上述短链醇类的浓度是0.5质量％。

优选地，上述短链醇类选自乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇和叔丁醇。

优选地，上述短链醇类是0.5质量％的叔丁醇。

优选地，包括50mM的Tris-HCl，0.1M的NaCl，2mM的MgSO₄，2mM的DTT，1质量％的Tween-80，0.5质量％的叔丁醇，pH为7.5。

原有的Endo IV酶的缓冲液经过优化后，能够极大提高Endo IV酶对DNA双链中3’端磷酸及磷酸单酯核苷酸阻断基团的切除效率，缩短切除时间，拓宽Endo IV酶在实际中的应用。

附图说明