[发明专利]具有温和洗脱pH的亲和色谱配体

说明书

本公开涉及色谱配体，例如包含至少两个结合单元和至少一个间隔结构域的色谱配体，其中，每个结合单元包含一个或两个免疫球蛋白结合结构域。

技术领域

本公开涉及色谱配体及其使用方法。

背景技术

葡萄球菌蛋白A(SPA)是最初在细菌金黄色葡萄球菌的细胞壁中发现的表面蛋白。由于其免疫球蛋白结合能力，葡萄球菌蛋白A(SPA)广泛用作生物技术和制药工业中单克隆抗体(即免疫球蛋白G或IgG)生产中的色谱配体。

葡萄球菌蛋白A(SPA)非常紧密地结合人IgG。由于高亲和力，从葡萄球菌蛋白A(SPA)配体洗脱结合的IgG需要苛刻的酸性条件，例如pH 3。然而，在强酸性条件下，IgG的结构部分地变性，这经常导致抗体的聚集和沉淀。已经表明了在约pH 3时，IgG结构和尺寸发生显著变化(Pete Gagnon等人，Conformational plasticity of IgG during protein Aaffinity chromatography，Journal of Chromatography A，1433(2016)98-105)。因此，变性可能对抗体产生有害。因此，需要开发能够在更高的pH下洗脱抗体的色谱配体，这将使抗体分子的结构损伤最小化。

发明内容

本公开涉及色谱配体及其使用方法。

在一个方面，本公开涉及具有至少两个结合单元和至少一个间隔结构域的多肽，其中每两个相邻的结合单元通过至少一个间隔结构域分开，并且每个结合单元包含一个或两个免疫球蛋白结合结构域。

在一些实施方式中，间隔结构域在pH约4.5至约7下不是无规卷曲或无序环。在一些实施方式中，每两个相邻的结合单元通过一个间隔结构域分开。免疫球蛋白结合结构域可以是葡萄球菌蛋白A(SPA)免疫球蛋白结合结构域或其功能变体。在一些实施方式中，免疫球蛋白结合结构域是SPA的结构域A、SPA的结构域B、SPA的结构域C、SPA的结构域D、SPA的结构域E、结构域Z、结构域Z_D36H或其功能变体。

在一些实施方式中，免疫球蛋白结合结构域具有与结构域Z至少90％相同的序列，并且免疫球蛋白结合结构域可以结合免疫球蛋白的Fc区。

在一些实施方式中，免疫球蛋白结合结构域是链球菌蛋白G(SPG)免疫球蛋白结合结构域或其功能变体。

在一些实施方式中，至少一个免疫球蛋白结合结构域是SPA免疫球蛋白结合结构域，并且至少一个免疫球蛋白结合结构域是SPG免疫球蛋白结合结构域。

在一些实施方式中，间隔结构域包含α螺旋或螺旋束。间隔结构域可以是L9连接螺旋或其功能变体。间隔结构域也可以是胰高血糖素的结构域(SEQ ID NO：14)、钙调蛋白的连接螺旋(SEQ ID NO：15)、肌球蛋白-10的单个α-螺旋结构域(SAH)(SEQ ID NO：16)、Sumo结构域(SEQ ID NO：17)、EGF结构域(SEQ ID NO：18)、Rad23A的泛素相关(UBA)结构域(SEQID NO：19)、IgG样结构域、溶菌酶或其功能变体。

在一些实施方式中，间隔结构域的最大直径小于

在一些实施方式中，间隔结构域具有少于80个氨基酸的残基。

在一些实施方式中，多肽具有式II所定义的序列：

S_0-1(R_1-2S)_nR_0-2 (式II)

其中，

R代表免疫球蛋白结合结构域；

S代表间隔结构域；

n是整数，表示蛋白质中重复单元的数量，并且n可以等于1或大于1。