[发明专利]吉氏芽孢杆菌进化枝丝氨酸蛋白酶

说明书

本文公开了一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体、编码其的核酸以及与其生产和使用有关的组合物和方法，所述一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体包括与一种或多种参比枯草杆菌蛋白酶相比具有改善的污垢去除性的一种或多种吉氏芽孢杆菌进化枝枯草杆菌蛋白酶变体。

本文公开了一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体、编码其的核酸以及与其生产和使用有关的组合物和方法，所述一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体包括与一种或多种参比枯草杆菌蛋白酶相比具有改善的污垢去除性的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体。含有丝氨酸蛋白酶的组合物适合用于清洁织物和硬表面，以及用于多种工业应用。

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丝氨酸蛋白酶是具有启动蛋白质肽键水解的活性位点丝氨酸的酶(EC编号3.4.21)。基于它们的结构，存在两大类丝氨酸蛋白酶：胰凝乳蛋白酶样(胰蛋白酶样)和枯草杆菌蛋白酶样。原型枯草杆菌蛋白酶(EC编号3.4.21.62)最初从枯草芽孢杆菌(B.subtilis)获得。枯草杆菌蛋白酶及其同源物是MEROPS分类方案的S8肽酶家族的成员。S8家族的成员在其氨基酸序列中具有顺序为Asp、His和Ser的催化三联体。

尽管在工业酶领域很久以来就已经知道丝氨酸蛋白酶，但是仍然需要适合于特定条件和用途的另外的丝氨酸蛋白酶。

本发明的变体、组合物和方法涉及重组丝氨酸蛋白酶变体、包含此类变体的组合物和与其相关的方法。含有本文公开的吉氏芽孢杆菌(B.gibsonii)进化枝丝氨酸蛋白酶的组合物适合用于清洁织物和硬表面，以及用于多种工业应用。

一些实施例涉及一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体，所述变体包含在对应于选自以下的SEQ ID NO:1位置的位置处包含两个、三个或四个或更多个取代的氨基酸序列：(i)99、126、127、128、和54；(ii)99、126、127、和128；(iii)S99A/E/H/I/K/M/N/Q/R/T/V、S126A/D/E/F/G/H/I/L/M/N/Q/R/T/V/W/Y、D127A/E/F/G/H/I/L/M/N/P/Q/S/T/V/W/Y、F128A/C/D/E/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/S/T/V/W、和P54E/G/I/L/Q/S/T/V；(iv)S99A/E/H/I/K/M/N/Q/R/T、S126A/D/E/G/I/L/M/N/Q/R/T/V/W/Y、D127A/E/F/G/H/I/L/M/N/P/Q/S/T/V/W/Y、和F128A/C/D/E/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/S/T/V/W；(v)S99E/H/I/K/M/Q/R/T、S126A/D/E/G/L/M/Q/V/Y、D127A/E/G/I/L/N/P/Q/S/T/V/W/Y、F128A/C/D/E/G/H/I/L/M/N/P/Q/S/T/V/W、和P54T；(vi)S99E/H/I/K/M/Q/R/T、S126A/D/E/G/L/M/Q/V/Y、D127A/E/G/I/L/N/P/Q/S/T/V/W/Y、和F128A/C/D/E/G/H/I/L/M/N/P/Q/S/T/V/W；(vii)S99E/H/I/K/M/R/T、S126A/G/M/N/T/V/Y、D127A/E/G/L/N/P/Q/S/T/V/W、F128A/C/D/E/G/I/L/M/N/Q/S/T/V/W、和P54T；(viii)S99E/H/I/K/M/R/T、S126A/G/M/N/T/V/Y、D127A/E/G/L/N/P/Q/S/T/V/W、和F128A/C/D/E/G/I/L/M/N/Q/S/T/V/W；(ix)S99E/H/I/M/R/T、S126A/G/M/T、D127A/E/G/L/N/P/S/T/V、F128A/C/D/E/G/I/N/Q/S/T/W、和P54T；(x)S99E/H/I/M/R/T、S126A/G/M/T、D127A/E/G/L/N/P/S/T/V、和F128A/C/D/E/G/I/N/Q/S/T/W；(xi)S99M、S126A/G、D127E、和F128C/D/E/G；(xii)S126A/G、D127E、和F128E/G；或(xiii)S99M、S126A、D127E、和F128C/D/E；并且其中所述变体的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:1的氨基酸序列相对应来编号。