[发明专利]自周边血液制备间质干细胞群的方法及其用途

说明书

本揭示内容是一种用以制备未分化之人类间质干细胞群(hMSCs)的方法。该方法包含以下步骤：从一供体取得周边血液；添加甘油于该周边血液中；在该周边血液中，从其他成体干细胞分离出人类间质干细胞；以及将该人类间质干细胞培养于含有甘油的培养液中，藉以制备适合用于移植的未分化人类间质干细胞群。

技术领域

本揭示内容关于一种分离及扩增间质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)及从其衍生细胞群的方法。

先前技术

可从各种组织分离间质干细胞，其包含但不限于新生儿组织(例如：人类脐带的华通氏胶(Wharton’s jelly))、骨髓、周边血液、胎盘、脐带血以及脂肪组织。在该些组织中，周边血液是最容易取得的间质干细胞来源。然而，周边血液中间质干细胞的含量相当低，即便于活体外扩增间质干细胞，相关领域仍无法取足量之间质干细胞，进而用于后续分化及相关应用。

因此，相关领域亟需发展一种可自周边血液取得间质干细胞的改善方法，以制备足以用于后续治疗用途的间质干细胞群。

发明内容

为了给读者提供基本的理解，以下提供本揭示内容的简要发明内容。此发明内容不是本揭示内容的广泛概述，同时非用来定义本发明的关键/必需组件或勾勒本发明的范围。其唯一目的是以简化的形式呈现本揭示内容的一些概念，以作为呈现于后文中更详细描述的序言。

本发明发现可从人类个体之周边血液取得间质干细胞(mesenchymal stemcells，MSCs)，并于含有甘油的培养液中进行体外扩增，从而制备一经分离之、实质上纯的、未分化人类间质干细胞(human mesenchymal stem cells，hMSCs)群，其适用于进行自体移植。

据此，本揭示内容的第一个态样是关于一种提供未分化之人类间质干细胞群的方法。该方法包含以下步骤：

(a)从人类个体取得周边血液；

(b)将甘油添加至步骤(a)之该周边血液中；

(c)分离步骤(b)之该周边血液中，相对于其他成体干细胞的人类间质干细胞；以及

(d)将步骤(c)之经分离的人类间质干细胞培养于一包含甘油的培养液中，藉以制备该人类间质干细胞群；

其中该培养液不含选自由颗粒性白血球群落刺激因子(granulocyte colonystimulating factor，G-CSF)、颗粒性白血球-巨噬细胞群落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor，GM-CSF)以及其组合所组成的群组之任何移动剂(mobilization agent)。

根据本揭示内容的实施方式，在步骤(a)中，将该周边血液收集于不含任何溶血剂的试管中。

根据本揭示内容的实施方式，在步骤(b)中，甘油于周边血液中的浓度约为每毫升1至10毫克。

根据本揭示内容的实施方式，在步骤(d)中，该培养液包含至少20％(体积比)的血清，且甘油于该培养液中的浓度约为每毫升0.1至1.0毫克，且于37℃下，将该人类间质干细胞培养于一包含该含甘油培养液的培养盘中至少16小时。

根据本揭示内容的替选实施方式，方法更可包含：

(e)将该人类间质干细胞转移至另一培养盘中，其表面积至少为步骤(d)之培养盘表面积的至少16倍大，且持续培养于包含甘油的培养液中，以制备未分化之人类间质干细胞群。

根据本揭示内容之实施方式，在步骤(e)中，将人类间质干细胞至少培养6天，以制备未分化之人类间质干细胞群。