[发明专利]用于测定的系统、方法和样品载体

说明书

本文提供了用于测定的样品载体，包括至少部分地由针脚表面上的至少一种物质涂覆的多个针脚，所述针脚设计成使得它们能够被引入微孔板的相应反应容器中。进一步描述了一种系统，包括用于测定的样品载体和微孔板。进一步描述了将物质涂覆到样品载体的一个多个针脚的方法。

技术领域

本发明涉及生物医学测定领域。特别地，本发明涉及用于测定的样品载体，使用样品载体测定的方法和用于测定的系统。

背景技术

微孔板，也称为多孔板或微量滴定板，是最关键的一次性可用实验室器具之一。有各种各样具有标准化的占用空间、支持设备和测量系统的板类型。

在20世纪60年代开发注塑成型之前，早期的微孔板是手工制作的，并作为商业化96孔微孔板的制造基础。模塑丙烯酸后来被聚苯乙烯(PS)取代，这是目前用于微孔板的最常见的塑料材料。

微孔板在实验室中的常见用途始于20世纪50年代后期，如酶联免疫吸附测定(ELISA)的免疫测定是在20世纪70年代中期开发的，其在CLIA2(化学发光免疫分析(Chemiluminescent Immunoassay)之前作为放射免疫测定(RIA)的更安全和方便的替代，最新一代测定技术出现于20世纪90年代初。

病原体检测的另一种方法涉及分子诊断技术，例如实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)，其能够检测和定量特定DNA或RNA序列的核酸扩增。

单重固相结合测定法的特征在于仅用一种捕获探针脚(例如蛋白质如抗体或抗原)涂覆的反应容器，并加入样品以确定是否可检测到任何单一分析物。这种并行单重测试的优点在于，不需要随后的确认/区分测试以确定感染的亚型或阶段，因此可以减少或甚至消除与之相关的额外成本。在一个孔中不同类型的涂覆蛋白质之间没有干扰，因此最大化了测定的灵敏度和特异性。

然而，对几种分析物进行单独测试的缺点是除了人员成本之外，材料成本也会显着增加。由于各种病原体生命周期导致的相关分析物的数量和变化的模式也使得检测变得困难。大多数情况下，不知道感染的哪个阶段。因此，需要测试跨越几个不同阶段的各种各样的分析物。

因此，待测分析物的数量越多，成本越高，但是，单独进行的测试的次数越多，其自身和组合可以被视为对诊断有用的单个测试。使用相同或更小工作体积的患者样本和分析进行更多测试至关重要，因为体积和样品瓶的增加直接影响加工成本。

因此，就反应容器的尺寸和工作体积而言的多路复用和小型化是期望的特征。当代流行的多重免疫测定是这样的技术，例如Luminex平台，其中高亲和力捕获配体离散地固定在荧光活化塑料微珠上并在液相中与样品混合。

对于血液筛查中的预期用途，特异性必须非常高，以避免由于假阳性而丧失健康的血液单位。该测定必须非常灵敏，以在病原体水平低时检测靶向分析物以缩短窗口期。为开发筛查和诊断技术投入了大量资源，旨在缩短初始感染和疾病检测之间的时间。

例如，HCV免疫测定的进展显着缩短了在第一代测定中观察到的平均5周的窗口期，并且允许在暴露后10周早期检测到抗HCV。目前改进的组合抗体/抗原免疫测定具有比核酸扩增测试(NAAT)长几天的窗口期。第一代HCV测定基于酵母表达的重组蛋白，其仅含有来自HCV基因组的NS4区(C100-3)的一个表位。第二代和第三代测定使用多重形式，包括来自核心，NS3和NS4区域的抗原；第四代具有改善的敏感性并缩短HCV感染与可检测抗体的出现之间的时间。

与单重测定相比，通常需要更敏感和昂贵的测试，例如重组免疫印迹(RIBA)，蛋白质印迹或核酸测试，以确认多重结果的阳性筛选或检测低水平的循环病原体，并鉴定和区分病原体的组和亚型。