[发明专利]红细胞靶向的因子VIII及使用其的方法

说明书

提供了靶向的因子VIII分子，其包含与特异性结合红细胞上的膜蛋白的至少一个结构域连接的因子VIII。所公开的靶向的凝血因子延长了它们的作用持续时间，且因此是对血液疾病诸如血友病A的治疗的改进。

领域

本文提供了靶向红细胞的因子VIII（FVIII）化合物，其具有改善的半衰期和/或增加的功效。还提供了通过选择性地将凝血因子靶向其生物学作用位点，诸如通过将因子VIII（FVIII）靶向红细胞来治疗患有凝血因子缺乏症的患者的方法。另外，本文提供了针对红细胞上的血型糖蛋白A的单链抗体。

背景

生物药物的有效性通常受到其在患者中起作用的持续时间的限制，特别是当疾病需要通过药物连续调节时。因此，对于临床中治疗剂的成功而言，药物动力学性质的增强通常比药物效力的优化更为关键。保护药物免受各种清除机制以延长半衰期的一种方法是添加靶向结构域，其促进药物与循环中长寿命蛋白（诸如基质蛋白）或细胞（诸如血细胞或内皮细胞）表面的结合。例如，已显示治疗性肽或蛋白定位于血细胞表面通过阻止正常清除机制来延长其循环半衰期（Chen, 等人, Blood 105(10):3902-3909, 2005）。多种分子可用作靶向结构域。

在另一种情况中，当蜱类抗凝血蛋白的Kunitz型蛋白酶抑制剂（KPI）结构域与阴离子磷脂、磷脂酰-L-丝氨酸（PS）结合蛋白、膜联蛋白V（ANV）连接时，融合蛋白（ANV-KPI）与非融合对应物相比，显示出更具活性并具有更高的体内抗血栓形成活性（Chen, 等人,2005）。因为ANV对PS和磷脂酰乙醇胺（PE）具有强的亲和力，所以假设融合蛋白ANV-KPI可以特异性靶向存在于血栓形成位点的富含PS/PE的阴离子膜结合的凝血酶复合物。类似地，Dong等人报道了将纤维蛋白选择性吸血蝠(Desmodus rotundus)唾液PA α1 (dsPA α1)与尿激酶（uPA/抗P-选择素抗体（HuSZ51）融合以产生这样的融合蛋白，其完全有功能且在体外测定中具有与非融合对应物相似的抗血栓活性。此外，融合蛋白HuSZ51-dsPAα1显示与凝血酶活化的人和狗血小板结合（Dong, 等人, Thromb. Haemost. 92:956-965, 2004）。

已经进行了其他努力以靶向抗凝血剂以预防凝块并降低与血栓性疾病相关的死亡率（参见例如 WO 94/09034）。Stoll等人（Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27:1206-1212, 2007）证明了更近期的进展，其中因子Xa（FXa）抑制剂、蜱类抗凝血肽（TAP）通过抗LIBS单链抗体（scFv_抗-LIBS）靶向GPIIb/IIIa上的配体诱导的结合位点（LIBS），所述GPIIb/IIIa是在血小板表面上大量表达的糖蛋白。融合蛋白scFv _抗 -L1BS-TAP显示即使在非靶向对应物失败的低剂量下也具有有效的抗凝血活性。

上述靶向的抗凝血剂是设计用于靶向特定细胞的融合蛋白。根据Stoll等人的说法，靶向的抗凝血剂应该是具有高效凝血抑制活性的小分子，其在与抗体融合时被保留。没有讨论抗凝血剂在其靶位点从融合蛋白释放。

Muzykantov等人（US 8,333,973）公开了单链抗原结合结构域与抗血栓剂，特别是血栓调节蛋白的融合蛋白。尽管Muzykantov等人还提出用scFv靶向血型糖蛋白A，但仅公开了针对血型糖蛋白A的鼠抗体。没有公开其他抗体或scFv。

此外，其他人已经努力靶向其他血细胞。例如，Hilden等人（US2016/0263230A1）公开了通过与结合TREM样转录物1蛋白（TLT-1）的单克隆抗体或其片段融合将FVIIa靶向血小板。通过缀合至糖基化位点或通过与FVIIa的直接遗传融合将抗体与FVIIa连接。