[发明专利]反义寡核苷酸

说明书

本发明涉及用于调节甘氨酸脱羧酶活性(GLDC)的反义寡核苷酸。具体地，本发明涉及能够诱导RNA外显子跳跃的反义寡核苷酸。还要求保护使用所述反义寡核苷酸治疗癌症和诱导外显子跳跃的药物组合物、试剂盒和方法。此外，提供一种基于评估源自患者的样品中GLDC核酸、蛋白质或活性的水平，用于帮助分类或确定癌症的预后或者为癌症患者选择治疗策略的方法。

技术领域

本发明涉及反义寡核苷酸。具体地，本发明涉及能够诱导RNA外显子跳跃的反义寡核苷酸。

背景技术

更具体地，本申请涉及癌症领域，具体涉及以下领域：过量表达甘氨酸脱羧酶(GLDC)的癌症，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)，以及其他癌症，诸如淋巴瘤(例如，滤泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤)、胶质母细胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和结肠癌等。本文中示出了直接和选择性靶向GLDC蛋白丰度(例如，通过反义寡核苷酸(ASO)介导的外显子跳跃)导致细胞周期停滞和/或癌细胞凋亡。还提供了证据表明正常组织中GLDC的部分消耗(例如，通过反义寡核苷酸(ASO)介导的外显子跳跃)没有副作用。

GLDC是属于氧化还原酶家族的酶，特别是那些以二硫化物作为受体作用于供体的CH-NH₂基团的酶。该酶参与甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢。它采用磷酸吡哆醛作为辅助因子。GLDC是来自所有真核生物中催化甘氨酸的降解的甘氨酸裂解系统的四种蛋白质中的一种。对于甘氨酸脑病，人体中高水平的甘氨酸或甘氨酸积聚是已知的。

在本说明书中列出或讨论明显在先公开的文件不应被视为承认该文件是现有技术的一部分或是公知常识。

本文中所提及的任何文件均通过引用整体并入本文。

发明内容

在本发明的第一方面中，提供了一种用于调节GLDC活性的分离的反义寡核苷酸。

优选地，术语“调节”是指激活、抑制、延迟、阻遏或干扰以下各项中的一项或多项；GLDC的活性；对GLDC的RNA剪接或翻译后加工；GLDC的磷酸化；GLDC的表达水平，其包括mRNA和/或前mRNA表达和蛋白质表达在内的GLDC表达的水平；或GLDC的亚细胞定位。优选地，在本发明中，寡核苷酸调节以下各项中的一项或多项的活性或水平：前mRNA、成熟mRNA和蛋白质表达。在各种实施例中，寡核苷酸抑制GLDC的表达或修饰其表达产物。在特定实施例中，寡核苷酸通过诱导GLDC前mRNA或成熟mRNA的外显子的跳跃来抑制GLDC的表达以诱导细胞周期停滞和/或凋亡。更具体地，寡核苷酸抑制GLDC在表达GLDC的细胞中的表达。

优选地，寡核苷酸与GLDC前mRNA或成熟mRNA的靶区域特异性杂交。如本文中所使用的，“杂交”意指根据Watson-Crick DNA互补性、Hoogstein结合(Hoogstein binding)或本领域已知的其他序列特异性结合的规则在两条或三条核酸链之间通过氢键产生的相互作用。杂交可以在本领域已知的不同严格条件下执行。

更优选地，本发明的反义寡核苷酸对一种或多种RNA结合剪接调节剂发挥空间位阻效应。例如，在实施例中，寡核苷酸通过空间位阻阻止mRNA的翻译。

优选地，寡核苷酸与GLDC RNA的外显子、内含子或外显子-内含子边界靶区域特异性杂交，该靶区域是选自包括以下各项的组中的任一项：外显子2、外显子3、外显子6、外显子7、外显子8、外显子9、外显子10、外显子12、外显子13、外显子15、外显子16、外显子19、外显子20、外显子21、内含子6、内含子7、以及内含子8。在下表中示出这些序列。

表：靶外显子和内含子的基因组序列