[发明专利]用于定量免疫组织化学的方法和系统

权利要求书

1.一种放大样品中的靶蛋白生物标志物的信号的非诊断方法,所述方法包含:

a.对该样品应用对该靶蛋白生物标志物特异性的第一生物标志物特异性结合剂；

b.对该样品应用对该第一生物标志物特异性结合剂特异性的第二结合剂,该第二结合剂是与二级酶缀合的；

c.对该样品应用包含与半抗原缀合的酪胺分子的酪胺剂,其中在该第二结合剂的位置处该二级酶催化该半抗原沉积至该样品上；

d.对该样品应用对该半抗原特异性的第三结合剂,该第三结合剂是与三级酶缀合的；并

e.对该样品应用可检测模块,其中该三级酶催化与该可检测模块的反应以使得该可检测模块可见；

由此该可检测模块是使用明视野显微术作为点状点可见的,其中该点状点指示该靶蛋白生物标志物；且

其中该可检测模块包含酪胺-罗丹明染料。

2.权利要求1的方法,其中该样品是组织样品。

3.权利要求2的方法,其中该组织样品是福尔马林固定,石蜡包埋组织样品。

4.权利要求1-3任一项的方法,其中该靶蛋白生物标志物包含蛋白质,碳水化合物,核酸,脂质,翻译后修饰,或其组合。

5.权利要求4的方法,其中该翻译后修饰包含磷酸根修饰,香叶基修饰,乙酰基修饰,泛素修饰,碳水化合物修饰,氨甲酰基修饰,或其组合。

6.权利要求1-5任一项的方法,其中该第一生物标志物特异性结合剂包含一级抗体。

7.权利要求6的方法,其中该一级抗体是天然的,未修饰的抗体。

8.权利要求6或权利要求7的方法,其中该一级抗体是单克隆的或多克隆的。

9.权利要求1-8任一项的方法,其中该第二结合剂包含二级抗体。

10.权利要求1-9任一项的方法,其中该二级酶包含氧化还原酶,水解酶,或过氧化物酶。

11.权利要求10的方法,其中该过氧化物酶包含辣根过氧化物酶。

12.权利要求1-11任一项的方法,其中该半抗原包含生物素,洋地黄毒苷,硝基吡唑,苯并呋咱,苯并二氮卓,硝基肉桂酰胺,或二硝基苯基。

13.权利要求1-12任一项的方法,其中该第三结合剂包含三级抗体。

14.权利要求13的方法,其中该三级抗体包含单克隆抗体。

15.权利要求1-14任一项的方法,其中该酪胺-罗丹明染料包含罗丹明110,罗丹明6G,四甲基罗丹明,磺酰罗丹明B,磺酰罗丹明101,或其组合。

16.权利要求1-15任一项的方法,其中该可检测模块包含DAB,4-硝基苯基磷酸酯,坚固红,溴氯吲哚基磷酸酯,硝基蓝四唑,BCIP/NBT,坚固红,AP橙,AP蓝,四甲基联苯胺,2,2’-连氮基-二-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐],邻联茴香胺,4-氯萘酚,硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷,邻苯二胺,5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-吡喃半乳糖苷,甲基伞形基-β-D-吡喃半乳糖苷,对硝基苯基-α-D-吡喃半乳糖苷,5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-葡糖苷酸,3-氨基-9-乙基咔唑,品红,碘硝基四唑四唑蓝,或四唑紫。

17.权利要求1-16任一项的方法,其中将该方法应用于其中检测和区分两种或更多种靶蛋白生物标志物的多路免疫组织化学测定法。

18.权利要求1-17任一项的方法,其中该靶蛋白生物标志物是分泌的分子。