[发明专利]贝壳杉烯酸羟化酶

权利要求书

1.具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的多肽，所述多肽包含氨基酸序列，当与包含SEQ IDNO：1或SEQ ID NO：3所示序列的贝壳杉烯酸13-羟化酶比对时，所述氨基酸序列包含对应于位置

136、248、336或403的任何氨基酸的至少一个氨基酸替换，

所述位置是参考SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3定义的，并且其中所述多肽与具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的参考多肽相比具有一种或多种改变的特性。

2.根据权利要求1所述的多肽，其中通过使用EMBOSS Needle比对方法，使用EBLOSUM62作为替换矩阵，使用缺口开放罚分为10和缺口延伸罚分为0.5将具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3示出的氨基酸序列比对来识别具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的多肽中对应于位置136、248、336或403的任何氨基酸的位置，所述位置是参考SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3定义的。

3.根据权利要求1或2所述的多肽，其中所述改变的特性是改变的贝壳杉烯酸13-羟化酶活性。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其中所述参考多肽包含SEQ ID NO：1或SEQID NO：3的贝壳杉烯酸13-羟化酶。

5.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，其中：

(i)在位置136处存在甲硫氨酸或缬氨酸；

(ii)在位置248处存在天冬酰胺；

(iii)在位置336处存在丝氨酸；并且/或者

(iv)在位置403处存在甘氨酸，

所述位置是参考SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3定义的。

6.根据前述权利要求中任一项所述的多肽，所述多肽包含与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：3具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。

7.具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的多肽，所述多肽包含与SEQ ID NO5、7、9、11或13中的任一个具有至少约95％序列同一性，至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。

8.包含编码根据前述权利要求中任一项所述的多肽的序列的核酸。

9.重组宿主，所述重组宿主包含根据权利要求8所述的核酸，任选地，所述重组宿主能够产生甜菊醇或甜菊醇糖苷。

10.根据权利要求9所述的重组宿主，所述重组宿主包含一种或多种编码以下的重组核苷酸序列：

具有对映-柯巴基焦磷酸合酶活性的多肽；

具有对映-贝壳杉烯合酶活性的多肽；以及

具有对映-贝壳杉烯氧化酶活性的多肽；以及任选地

具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的多肽，其不同于根据权利要求1至6中任一项所述的多肽。

11.根据权利要求9或10所述的重组宿主，所述重组宿主包含编码具有NADPH-细胞色素p450还原酶活性的多肽的重组核酸序列。

12.根据权利要求9至11中任一项所述的重组宿主，所述重组宿主包含编码以下一种或多种的重组核酸序列：

(i)具有UGT74G1活性的多肽；

(ii)具有UGT2活性的多肽；

(iii)具有UGT85C2活性的多肽；以及

(iv)具有UGT76G1活性的多肽。