[发明专利]可用于LC-MS分析的标记的聚糖氨基酸复合物及其制备方法

权利要求书

1.一种表征蛋白质或肽的糖基化的方法，包括以下步骤：

提供多种糖基化蛋白质和/或肽；

用变性溶液使所述多种糖基化蛋白质和/或肽变性以产生变性的混合物，其中所述变性溶液包含MS相容的表面活性剂、有机溶剂、脲和/或胍；

将所述变性的混合物与多种蛋白酶组合以产生聚糖氨基酸复合物，其中所述多种蛋白酶裂解所述蛋白质或所述肽；

用HILIC SPE纯化所述聚糖氨基酸复合物，其中所述聚糖氨基酸复合物被分离；以及

用加标签试剂对所述聚糖氨基酸复合物加标签以产生标记的聚糖氨基酸复合物；

检测所述标记的聚糖氨基酸复合物；以及

通过所述标记的聚糖氨基酸复合物的检测来表征所述蛋白质或肽的糖基化。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述变性溶液包含3-[(2-甲基-2-十一基-1,3-二氧戊环-4-基)甲氧基]-1-丙烷磺酸钠。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质或所述肽使用溶液中胃蛋白酶消化。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质或所述肽用固定化胃蛋白酶消化。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质或所述肽用溶液中链霉蛋白酶消化。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质或所述肽用固定化链霉蛋白酶消化。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质或所述肽用溶液中胰蛋白酶消化。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质或所述肽用固定化胰蛋白酶消化。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质或所述肽用pH为7.5至9.0的溶液中胰凝乳蛋白酶消化。

10.根据权利要求1所述的方法，其中使所述蛋白质或所述肽在约50℃至90℃之间的温度下变性。

11.根据权利要求1所述的方法，其中固定化内肽酶和外肽酶同时用于消化所述蛋白质或所述肽。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述加标签试剂为具有大于约的非极性表面区域和pKa大于约7的碱性残基的两亲化合物，并且形成所述两亲化合物和所述聚糖氨基酸复合物的缀合物。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述非极性表面区域介于约和约之间。

14.根据权利要求12所述的方法，其中所述非极性表面区域介于约和约之间。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白质或所述肽具有连接到聚糖的丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸或羟赖氨酸。

16.根据权利要求1所述的方法，其中通过液相色谱、质谱、荧光和/或紫外检测来检测所述标记的聚糖氨基酸复合物。

17.一种表征蛋白质或肽的糖基化的方法，包括以下步骤：

提供多种糖基化蛋白质和/或肽；

将所述多种糖基化蛋白质和/或肽与多种蛋白酶和消化缓冲液混合，其中所述多种蛋白酶裂解具有丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸或羟赖氨酸的所述蛋白质和/或所述肽以产生聚糖氨基酸复合物；以及

用加标签试剂对所述聚糖氨基酸复合物加标签以产生标记的聚糖氨基酸复合物；

检测所述标记的聚糖氨基酸复合物；以及

通过所述标记的聚糖氨基酸复合物的LC、MS或LC/MS分析和检测来表征所述蛋白质和/或所述肽的糖基化。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述消化缓冲液为MS相容的。