[发明专利]修饰的杀真菌素链霉菌分离物及其用途

说明书

本发明涉及修饰的杀真菌素链霉菌分离物，包含这些分离物的组合物，以及使用此类分离物和组合物以生物合成持久杀菌素(持久霉素)的方法。此外，本发明涉及修饰的杀真菌素链霉菌分离物，其以更有效的方式生物合成持久杀菌素并促进持久霉素的产生。

相关申请的交叉引用

本申请根据35 U.S.C. §119(c)要求于2016年12月6日提交的美国临时申请序列号62/430,455的优先权，所述临时申请的内容在此以其整体通过引用并入。

发明领域

本发明涉及修饰的杀真菌素链霉菌(Streptomyces fungicidicus)分离物，包含这些分离物的组合物，以及使用此类分离物和组合物以生物合成持久杀菌素(enduracidin；持久霉素(enramycin))的方法。本发明进一步涉及修饰的杀真菌素链霉菌分离物，其以更有效的方式生物合成持久杀菌素并促进持久霉素的产生。

发明背景

持久杀菌素(也称为持久霉素，并且作为Enradin^®由MSD Animal Health出售)是由细菌杀真菌素链霉菌(用于产生持久杀菌素的天然制造者)生物合成并分泌的天然存在的17个氨基酸的脂酯肽(lipodepsipeptide)抗生素。

持久杀菌素是持久杀菌素类似物的通称，且包括持久杀菌素A、B、C和D。所述肽可以从发酵液和菌丝体中分离，其主要作为持久杀菌素A和B (其所连接的脂质链的长度相差一个碳)的混合物。在结构上，持久杀菌素的区别在于通过酰胺键与天冬氨酸残基连接的C₁₂或C₁₃ 2Z,4E支链脂肪酸部分，以及许多非蛋白原性的氨基酸残基(如持久双杀霉素(enduracididine)，4-羟基苯基甘氨酸，3,5-二氯-4-羟基苯基甘氨酸，瓜氨酸和鸟氨酸)的存在。

持久杀菌素针对广谱的革兰氏阳性生物体展示有效的体外和体内抗细菌活性，所述革兰氏阳性生物体包括产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)和耐万古霉素肠球菌(vancomycin-resistant Enterococcus, VRE)。持久杀菌素通过与细胞外脂质II (细菌细胞壁的前体)复合而抑制细菌肽聚糖细胞壁的生物合成。脂质II与持久杀菌素复合的位点不同于万古霉素识别的位点，并且是持久杀菌素针对万古霉素抗性生物体的作用的原因。迄今为止，没有证实的持久杀菌素与任何临床使用的抗生素的交叉抗性，并且没有发展，获得或可转移的抗性的证据。没有任何已知形式的可转移抗性机制，缺乏口服生物利用度，其低毒性，以及对梭菌属种(Clostridium spp.)的显著抗细菌活性，已使持久杀菌素成为控制家禽中梭菌性肠炎的关键抗生素。

因此，当在家禽饲料中施用时，持久杀菌素抑制在家禽中引起坏死性肠炎和生长抑制的细菌的生长。持久杀菌素还具有零时间停药期。此外，持久杀菌素在饲料和颗粒中稳定，能够以非常低的剂量向鸡施用，并且不导致在来自处理过的鸡的肉和蛋中发现残留物。

多年来，已经获得许多杀真菌素链霉菌菌株，其已经过修饰以改进这些产生持久杀菌素的微生物的效率，所述微生物例如杀真菌素链霉菌B-5477 (IFO-12439，ATCC-21013)和杀真菌素链霉菌B-5477-m (IFO-12440，ATCC-21014) [参见例如U.S. 3,577,530，U.S. 3,786,142和U.S. 4,465,771]。然而，仍有进一步改进此类修饰的杀真菌素链霉菌分离物以产生甚至更有效的产生持久杀菌素的微生物的显著需求。

本文引用任何参考文献不应被解释为承认这样的参考文献可作为本申请的“现有技术”获得。