[发明专利]抑制CD73表达的免疫抑制恢复寡核苷酸

说明书

本发明涉及包含12至18个核苷酸的免疫抑制恢复寡核苷酸，其中至少一个核苷酸被修饰，并且该寡核苷酸与SEQ ID NO.1(人)的胞外酶(CD73)的核酸序列和/或SEQ ID NO.2(鼠)的序列的胞外酶(CD73)的核酸序列杂交，其中该寡核苷酸抑制至少50％的CD73表达。本发明还涉及包含这种寡核苷酸的药物组合物。

技术领域

本公开涉及与胞外酶(NT5E或CD73)的核酸序列杂交的免疫抑制恢复寡核苷酸，以及包含这种免疫抑制恢复寡核苷酸和药用载体、赋形剂和/或稀释剂的药物组合物。

背景技术

近年来，通过应用免疫疗法，特别是通过所谓的“免疫检查点”的抑制剂，对如恶性肿瘤的几种不同疾病的治疗非常成功。这些检查点是免疫系统中的分子，其上调(共刺激分子)或下调信号。治疗方法的概念基于内源性抗肿瘤免疫反应的激活。例如，许多癌症分别通过抑制T细胞和NK细胞活性来保护自己免受免疫系统的侵害。免疫检查点调节剂，即刺激剂或抑制剂，例如针对CTLA-4、PD-1、PD-L1、LAG-3、VISTA、A2AR、BTLA、IDO、CD39、CD73、STAT3、TDO2、TIM-3、MICA、NKG2A、KIR、TIGIT、TGF-β、Ox40、GITR、CD27、CD160、2B4和4-1Bb中的一种或多种。

CD73需要被认为是提高对不同类型癌症的免疫力的一种新颖且有前景的候选物。CD73是一种胞外酶(NTPdase)，并且催化AMP向免疫抑制性腺苷的转化。CD73协同作用，但在CD39的下游，已知将ATP转化为ADP，并将ADP转化为AMP。腺苷通过腺苷受体A1、腺苷受体A_2A、腺苷受体A_2B和腺苷受体A₃发挥其作用。表达腺苷受体并因此可能受腺苷的免疫调节作用影响的免疫细胞的范围包括T淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞、NKT细胞、巨噬细胞、DC、中性粒细胞、肥大细胞和B细胞。

CD73存在于大多数组织和许多细胞类型中，包括淋巴细胞的亚群、巨噬细胞、树突细胞、内皮细胞和上皮细胞。缺氧诱导小鼠微血管内皮细胞中的CD73 mRNA、蛋白质表达并增加CD73活性。特别地，CD73在许多不同的人(实体和血液)肿瘤中高度表达，并且其升高的表达和活性与肿瘤侵袭性和转移相关并且具有较短的患者存活期。CD73的RNA表达和酶活性在不同的乳腺癌细胞系中是可变的。

将死的癌细胞将ATP释放到肿瘤微环境中的细胞外空间。活的肿瘤细胞通常表达高水平的CD39和CD73，并将ATP转化为免疫抑制性腺苷。由此，肿瘤细胞能够进行不受控制的增殖和扩增。通过与淋巴细胞上的A_2A或A_2B受体结合，腺苷介导对这些细胞的免疫抑制信号。例如，T细胞的增殖、细胞毒性细胞因子产生和激活受到抑制。NK细胞显示出降低的细胞毒性潜力。腺苷诱导巨噬细胞中的替代激活(免疫抑制性M2表型)，导致促炎性细胞因子产生减少，但免疫抑制性细胞因子IL-10的产生增加。CD73作为相关治疗靶标在不同肿瘤中的重要作用由以下事实强调：使用CD73或A₂A受体敲除小鼠的肿瘤模型显示出改善的疾病结果。

抗人CD73单克隆抗体如Innate Pharma的抗CD73抗体(例如，Innate PharmaPoster#iph_poster_aarc2016_cd73)目前正在基于免疫肿瘤学细胞的试验中进行临床前研究。然而，由于空间位阻，针对CD73的单克隆抗体可能无法定位于肿瘤微环境中。此外，CD73的不可水解的小分子抑制剂如AMPCP(腺苷5'-(α,β-亚甲基)二磷酸；例如，结构20,2161-2173,2012年12月5日)(其为ADP类似物)竞争性地抑制CD73活性，已经在动物模型中体外和体内测试，但需要相对高的浓度和重复给药以成功阻断CD73酶活性。

免疫疗法已经导致长期缓解，但到目前为止只对小患者群体。原因可能是许多免疫检查点和可选的其它免疫抑制机制参与例如免疫系统和肿瘤细胞之间的相互作用。免疫检查点和潜在的其它机制的组合可以根据肿瘤和受试者的个体状况而不同，以逃避身体的防御。