[发明专利]结肠类器官及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种诱导人类结肠类器官形成的方法，其包含以下步骤：

a.使定形内胚层(DE)与FGF信号传导途径激活物和WNT信号传导途径激活物(例如，CHIRON/GSK2抑制剂)接触持续足以使所述DE形成中-后肠球状体的时间段；

b.使步骤(a)的所述中-后肠球状体与BMP激活物和EGF信号传导途径激活物接触持续足以形成所述人类结肠类器官的时间段，其中所述人类结肠类器官表达SATB2。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述DE源自选自以下的前体细胞：胚胎干细胞、胚胎生殖细胞、诱导多能干细胞、中胚层细胞、定形内胚层细胞、后内胚层细胞、后肠细胞或其组合。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述FGF信号传导途径激活物选自小分子FGF信号传导途径激活物、基于蛋白质的FGF信号传导途径激活物、FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23或其组合。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述WNT信号传导途径激活物选自蛋白质Wnt信号传导途径激活物、小分子Wnt信号传导途径激活物，优选氯化锂；2-氨基-4,6-二取代嘧啶(杂)芳基嘧啶；IQ1；QS11；NSC668036；DCA β-连环蛋白；2-氨基-4-[3,4-(亚甲二氧基)-苄基-氨基]-6-(3-甲氧基苯基)嘧啶、Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11、Wnt16、GSK3抑制剂，优选CHIRON，或其组合。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述BMP激活物选自BMP2、BMP4、BMP7、BMP9、激活BMP途径的小分子、激活BMP途径的蛋白质Noggin、Dorsomorphin、LDN189、DMH-1、ventromophin及其组合。

6.据前述权利要求中任一项所述的方法，其中足以使所述DE形成中-后肠球状体的所述时间段通过步骤(a)的所述中-后肠球状体的CDX2表达来确定。

7.据前述权利要求中任一项所述的方法，其中足以使所述中-后肠球状体形成所述人类结肠类器官的所述时间段通过所述人类结肠类器官的细胞的SATB2和CDX2表达。

8.据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述HCO的特征在于存在结肠肠内分泌细胞(EEC)。

9.据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述HCO的特征在于存在隐窝并且基本上不含绒毛。

10.据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述HCO包含结肠特异性杯状细胞。

11.据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述HCO基本上不含潘氏(Paneth)细胞。

12.据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述HCO分泌结肠特异性激素INSL5。

13.一种HCO，其根据权利要求1至7中任一项所述的方法获得。

14.一种形成结肠组织的方法，其包含在哺乳动物，优选啮齿动物，优选免疫受损的啮齿动物，优选免疫受损的小鼠的肾囊下植入根据权利要求1至7中任一项所述的HCO。