[发明专利]用于筛选候选化合物引起全身性毒性或肝毒性的潜能的方法和系统

权利要求书

1.一种筛选化合物引起全身毒性和/或肝毒性的潜能的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供待筛选的化合物；

(b)建立肝细胞系统HCS，包括胆汁酸合成、胆汁酸转运和/或胆汁酸调节的能力；

(c)将所述HCS暴露于一定浓度范围的胆汁酸以确定所述胆汁酸的毒性谱，其中所述胆汁酸毒性谱包含毒性能力；

(d)在所筛选的化合物存在的情况下将所述HCS暴露于一定浓度范围的胆汁酸以确定所述胆汁酸的毒性谱，其中所述胆汁酸毒性谱包含毒性能力；以及

(e)比较步骤(c)和步骤(d)的所述胆汁酸的所述毒性能力，以确定所述化合物引起全身毒性和/或肝毒性的潜能，其中与步骤(c)相比，在步骤(d)中所述毒性能力增加表明引起胆汁淤积肝毒性的潜能，在步骤(d)中所述毒性能力降低表明引起胆汁淤积而致使全身毒性的潜能；

其中，确定所述化合物引起全身毒性和/或肝毒性的潜能包括：

(1)如果化合物引起胆汁酸毒性能力增加，则将所述化合物表征为具有引起胆汁淤积肝毒性的能力；和(2)测定化合物是否是胆汁酸外排抑制剂、法尼酯X受体FXR拮抗剂或两者的组合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中胆汁酸外排的抑制包含胆汁盐输出蛋白BSEP的抑制。

3.根据权利要求1所述的方法，其中引起所述胆汁酸毒性能力降低的化合物表征为具有引起胆汁淤积而致使全身毒性的潜能。

4.根据权利要求3所述的方法，其中致使全身毒性的胆汁淤积是由胆汁酸摄取的抑制引起的。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中确定所述化合物引起全身性毒性或肝毒性的易感性包括将所述化合物表征为胆汁酸外排抑制剂、FXR拮抗剂、胆汁酸摄取的抑制剂、或者以上皆非。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述化合物是候选药物，其中所述候选药物表征为具有引起全身毒性和/或肝毒性的低概率，或具有引起全身毒性和/或肝毒性的高概率。

7.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中胆汁酸转运包括胆汁酸摄取、基底外侧外排和/或微管外排。

8.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述胆汁酸的浓度范围包括模拟体内细胞内禁食的细胞内浓度和/或餐后浓度。

9.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述胆汁酸的浓度范围包括足以激活FXR反馈机制的胆汁酸细胞内浓度。

10.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述胆汁酸毒性谱的确定包括使用细胞毒性化验装置测量肝毒性响应。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述细胞毒性化验装置选自由酶渗漏化验装置、ATP、APOTOX Glo和它们的组合组成的组。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述酶渗漏化验装置选自由ALT、AST和LDH组成的组。

13.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，还包括将所述HCS暴露于多种胆汁酸以确定所述多种胆汁酸的毒性谱，其中所述胆汁酸毒性谱包括多种毒性能力。

14.根据权利要求13所述的方法，其中在缺少和存在所述化合物的情况下在HCS中测量所述多种毒性能力，以预测所述化合物的肝毒性的潜能。

15.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述HCS包括利用原代肝细胞或其他肝细胞系统进行的二维培养或三维培养。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述二维培养包括肝细胞的夹层培养SCH，其中所述SCH包含人肝细胞。