[发明专利]用含有血小板样细胞的富含血小板的血液级分使成体细胞重编程的组合物和方法

权利要求书

1.一种用于将成体细胞功能重编程为胰岛素生产细胞的方法，其包括：

(a) 从人受试者中分离外周血单核细胞(PBMC)的群体；

(b) 从脐带血或外周血中分离包含血小板样细胞的富含血小板的级分；

(c) 使步骤(a)的PBMC群体与步骤(b)的富含血小板的级分在体外接触，其中所述接触有效地将PBMC重编程为表达一种或多种胚胎生物标记物的未成熟细胞类型；和

(d) 在有效生成胰岛素生产细胞群体的培养条件下，在体外扩增未成熟细胞类型，其中所述胰岛素生产细胞群体表达人β细胞特异性转录因子，并且在功能上等同于人胰腺β细胞。

2.根据权利要求1的方法，其进一步包括从Ficoll-Paque梯度级分中分离步骤(a)的成体PBMC。

3.根据权利要求1的方法，其进一步包括从Ficoll-Paque梯度级分中分离包含血小板样细胞的富含血小板的级分。

4.根据权利要求1的方法，其中所述包含血小板样细胞的富含血小板的级分包含全细胞、线粒体、微粒、外来体、裂解细胞和α颗粒中的一种或多种。

5.根据权利要求4的方法，其中包含全细胞、线粒体、微粒、外来体、裂解细胞和α颗粒中的一种或多种的所述包含血小板样细胞的富含血小板的级分，含有转录因子、生长因子或两者。

6.根据权利要求4的方法，其中所述全细胞包含造血干细胞、造血祖细胞、普通淋巴样祖细胞、普通髓样祖细胞、巨核细胞-红细胞祖细胞；粒细胞-单核细胞祖细胞、巨核细胞谱系定向祖细胞、巨核细胞和血小板样细胞中的一种或多种。

7.根据权利要求1的方法，其中来自步骤(c)的表达一种或多种胚胎生物标记物的血小板样细胞包含OCT3/4、NANOG、NKX6.1、MAFA、Sur1、Kir6.2、PD-L1、CD270、半乳糖凝集素9、TGF-β1、AIRE、CCR3、CXCR4和CCL2中的一种或多种。

8.根据权利要求1的方法，其中所述重编程的成体细胞包含选自神经元细胞、内皮细胞、心肌细胞、肌细胞、上皮细胞、角膜内皮细胞、视网膜色素细胞、成骨细胞、角质形成细胞、毛囊细胞和腺细胞的一种或多种细胞类型。

9.一种用于治疗患有以高血糖为特征的疾病的受体受试者的方法，其包括：

(a) 从人供体中分离外周血单核细胞(PBMC)群体；

(b) 从供体的脐带血或外周血中分离包含血小板样细胞的富含血小板的级分；

(c) 使步骤(a)的PBMC群体与步骤(b)的富含血小板的级分在体外接触，其中所述接触有效地将PBMC重编程为表达一种或多种胚胎生物标记物的未成熟细胞类型；

(d) 在有效生成含有治疗量的胰岛素生产细胞群体的细胞产物的培养条件下，在体外扩增未成熟细胞类型，其中所述胰岛素生产细胞群体表达人β细胞特异性转录因子，并且在功能上等同于人胰腺β细胞；和

(e) 将来自步骤(d)的细胞产物施用于受体受试者；

其中来自步骤(d)的含有治疗有效量的胰岛素生产细胞群体的细胞产物有效减少高血糖疾病的症状。

10.根据权利要求9的方法，其中所述供体和受体受试者是相同个体。

11.根据权利要求9的方法，其中所述高血糖疾病是自身免疫疾病。

12.根据权利要求11的方法，其中所述自身免疫疾病是糖尿病。

13.根据权利要求11的方法，其中所述自身免疫疾病是1型糖尿病。

14.根据权利要求9的方法，其中所述供体对于受体受试者是同种异体的。