[发明专利]香叶基香叶基焦磷酸酯合酶

权利要求书

1.一种具有香叶基香叶基焦磷酸酯合酶活性的变体多肽，所述变体多肽包含氨基酸序列，当与包含SEQ ID NO：1所示序列的香叶基香叶基焦磷酸酯合酶比对时，所述氨基酸序列包含至少一个对应于位置92、100或235的任何氨基酸的氨基酸残基的取代，所述位置是参考SEQ ID NO：1定义的，并且其中所述变体与具有香叶基香叶基焦磷酸酯合酶活性的参考多肽相比具有一种或多种修饰的性质。

2.根据权利要求1所述的变体多肽，其中，所述修饰的性质是修饰的香叶基香叶基焦磷酸酯合酶活性。

3.根据权利要求1或2所述的变体多肽，其中，所述参考多肽包含SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：17的香叶基香叶基焦磷酸酯合酶。

4.根据前述权利要求中任一项所述的变体多肽，其中，所述变体多肽是非天然存在的多肽。

5.根据前述权利要求中任一项所述的变体多肽，所述变体多肽包含除权利要求1中定义的那些取代之外的附加取代。

6.根据前述权利要求中任一项所述的变体多肽，所述变体多肽与SEQ ID NO：1或SEQID NO：17具有至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％，具有至少97％，至少98％或至少99％的序列同一性。

7.一种具有香叶基香叶基焦磷酸酯合酶活性的变体多肽，所述变体多肽包含与SEQ IDNO：3、5、7、9、11、13、15、18至33中的任一个具有至少约95％序列同一性，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列。

8.一种多核苷酸，其包含编码根据前述权利要求中任一项所述的多肽的序列。

9.一种核酸构建体，例如表达载体，所述核酸构建体包含权利要求8所述的多核苷酸序列，所述多核苷酸序列可操作地连接至一个或多个能够指导香叶基香叶基焦磷酸酯合酶在合适的表达宿主中表达的控制序列。

10.一种重组宿主，例如能够生产甜菊醇或甜菊醇糖苷的重组宿主，所述重组宿主包含根据权利要求8所述的多核苷酸或根据权利要求9所述的核酸构建体。

11.根据权利要求10所述的重组宿主，所述重组宿主包含一种或多种重组核苷酸序列，所述重组核苷酸序列编码：

具有对映-柯巴基焦磷酸酯合酶活性的多肽；

具有对映-贝壳杉烯合酶活性的多肽；

具有对映-贝壳杉烯氧化酶活性的多肽；以及

具有贝壳杉烯酸13-羟化酶活性的多肽。

12.根据权利要求10或11所述的重组宿主，所述重组宿主包含编码具有NADPH-细胞色素p450还原酶活性的多肽的重组核酸序列。

13.根据权利要求10-12中任一项所述的重组宿主，所述重组宿主包含编码以下一种或多种的重组核酸序列：

(i)具有UGT74G1活性的多肽；

(ii)具有UGT2活性的多肽；

(iii)具有UGT85C2活性的多肽；以及

(iv)具有UGT76G1活性的多肽。

14.根据权利要求10-13中任一项所述的重组宿主，其中，所述宿主属于以下属中的一种：Saccharomyces、Aspergillus、Pichia、Kluyveromyces、Candida、Hansenula、Humicola、Issatchenkia、Trichosporon、Brettanomyces、Pachysolen、Yarrowia、Yamadazyma或Escherichia。