[发明专利]核酸的检测方法在审
申请号: | 201780066203.2 | 申请日: | 2017-11-10 |
公开(公告)号: | CN110023506A | 公开(公告)日: | 2019-07-16 |
发明(设计)人: | 关口翔太;中川舞;伊藤正照;泽田慎二郎 | 申请(专利权)人: | 东丽株式会社 |
主分类号: | C12Q1/6848 | 分类号: | C12Q1/6848 |
代理公司: | 北京市中咨律师事务所 11247 | 代理人: | 段承恩;孙丽梅 |
地址: | 日本*** | 国省代码: | 日本;JP |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 核酸 氧化铈载体 检测 吸附 核酸吸附 扩增反应 杂交反应 混合物 回收 洗脱液 羧酸 | ||
一种核酸的检测方法,是检测核酸的方法,其包含以下工序:工序a),将包含羧酸和/或其盐的溶液、氧化铈载体和包含核酸的试样混合,使该核酸吸附于氧化铈载体的工序;工序b),从在工序a)中混合后的混合物中分离吸附有上述核酸的氧化铈载体的工序;工序c),在工序b)中分离出的吸附有核酸的氧化铈载体中加入洗脱液来回收核酸的工序;工序d),通过杂交反应或核酸的扩增反应来检测在工序c)中回收的核酸的工序。
技术领域
本发明涉及检测核酸的方法。
背景技术
随着使用了核酸的实验技术的发展,进行新基因探索、解析,碱基序列信息与功能的关系变得明确。其结果是,即使在癌等疾病的鉴定、外来的病原体的感染的鉴定等医疗现场也通过核酸检测进行筛选检查、临床检查等。近年来,研究了各种核酸的检测方法,核酸的检测灵敏度提高了,但为了解析更高级的基因,要求核酸的检测灵敏度进一步提高。
核酸的检测方法中,可举出使用微阵列、PCR等来检测作为目标的序列的方法。已知这样的核酸的检测方法通过使探针、引物最佳化,或使反应条件最佳化从而检测灵敏度提高,但同时已知灵敏度也根据作为检测对象的核酸的纯度、量而变化。即,从核酸的回收到检测的多个工序会影响基因的解析结果。
这里,作为代表性的核酸的回收方法,可举出苯酚-氯仿提取、乙醇沉淀和核酸对二氧化硅的吸附等。其中最通用的方法是专利文献1所记载的、使核酸对包含二氧化硅的金属氧化物吸附、溶出而进行回收的Boom法。该方法具有下述特征:在通过离心操作从吸附了核酸的二氧化硅回收核酸的同时能够进行核酸浓缩。然而,这样的方法需要使用复杂的操作、有机溶剂。由于核酸检测在医疗现场也会利用,因此优选为能够不使用复杂的操作、有机溶剂而回收核酸,效率好地检测核酸的方法。
作为不使用有机溶剂而能够进行从核酸回收到检测的方法,专利文献2中记载了使用氧化铁等具有磁性的无机成分作为载体,使核酸吸附而回收的方法。该方法中,由于具有无机成分溶出于核酸的回收液,回收的核酸的纯度降低的课题,因此一并记载了用聚合物、二氧化硅、二氧化钛、二氧化铈等金属氧化物涂布于无机成分的载体的方法。记载了通过该方法获得的核酸能够直接就那样用于PCR等酶反应。
此外,作为不使用有机溶剂的其它方法,有使用了硅胶的离子交换柱的方法。专利文献3中记载了使离子交换柱所使用的硅胶的载体含有二氧化钛、二氧化铈、氧化锆、氧化铪等比重大的粒子,提高柱的密度,使核酸的回收量提高的方法。然而,专利文献3中并未记载能够以何种程度的灵敏度检测核酸。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:美国专利第5234809号说明书
专利文献2:日本特开2007-6728号公报
专利文献3:日本特表2002-510787号公报
发明内容
发明所要解决的课题
如上所述,研究了核酸的回收方法和之后的检测方法。然而,专利文献2中实际上并未公开可以回收何种形态的核酸。此外,也并未记载能够以何种程度的灵敏度检测核酸。因此,后述的比较例1中将专利文献2所记载的条件尽可能再现,通过PCR法评价了核酸的检测灵敏度。然而,专利文献2的方法几乎不能通过PCR检测核酸。
本发明人等利用专利文献2所记载的氧化铈载体,以使核酸的检测灵敏度提高作为目的,进行了深入研究,完成了本发明。
用于解决课题的方法
本发明人等为了使核酸的检测灵敏度提高,着眼于使用氧化铈作为载体的核酸的回收方法。通过以氧化铈作为载体,在包含羧酸的条件下回收核酸,可以使回收的核酸、特别是具有高级结构的核酸的检测灵敏度提高。
本发明如下所述。
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