[发明专利]人肝前体细胞的制备方法

说明书

本发明提供一种在生物体外将人成熟肝细胞重编程为具有自我复制能力的肝前体细胞的方法。一种人肝前体细胞的制备方法，包括将人成熟肝细胞在含有血清、A‑83‑01和CHIR99021的培养基中进行培养。

技术领域

本发明涉及人肝前体细胞的制备方法。

背景技术

针对严重的肝疾病的有效的治疗方法现在仅为肝移植，但绝对的供体不足成为问题。为了代替肝移植，迄今为止持续进行了由iPS细胞分化诱导肝细胞并用于移植治疗的尝试。

然而，由于iPS细胞具有分化全能性和高的增殖能力，因此，也有随着对免疫缺陷小鼠的移植而形成畸胎瘤的报告，在由iPS细胞制作肝细胞时即使稍微混入未分化iPS细胞时，产生在移植后形成肿瘤的危险性。另外，由于使用iPS细胞来向肝脏等的内胚叶细胞进行高效分化的诱导法尚未确立，现状是，不可能由iPS细胞制作能够代替肝功能程度的肝细胞。

针对这种情况，在成体肝脏内极少数存在的肝前体细胞也开始被认为是可利用的细胞来源。另外，最近的研究表明：在慢性肝炎时，成熟肝细胞被重编程为具有分化为肝细胞和胆管上皮细胞的双分化能力的前体细胞(非专利文献1～4)。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1:Yanger K.et.al.,Genes&Development,pp.719-724,27,2013

非专利文献2:Tanimizu N.et.al.,Journal of Biological Chemistry,pp.7589-7598,289(11),2014

非专利文献3:Yimlamai D.et.al.,Cell,pp.1324-1338,157,2014

非专利文献4:Tarlow B.D.et.al.,Cell Stem Cell,pp.605-618,15,2014

发明内容

本发明的目的在于提供在生物体外将人成熟肝细胞重编程为具有自我复制能力的人肝前体细胞的方法。

本发明人等为了解决本课题反复进行了深入研究，结果发现通过在生物体外将人成熟肝细胞在含有血清、A-83-01(TGF-β信号抑制剂)和CHIR99021(GSK3抑制剂)的培养基中进行培养，从而能够重编程为具有自我复制能力的人肝前体细胞，以至完成了本发明。

即，本发明提供以下所示的人肝前体细胞的制备方法。

项1.一种人肝前体细胞的制备方法，包括将人成熟肝细胞在含有血清、A-83-01和CHIR99021的培养基中进行培养。

项2.根据项1所述的人肝前体细胞的制备方法，其中，所述人成熟肝细胞来自婴幼儿。

项3.根据项1或2所述的人肝前体细胞的制备方法，其中，所述血清为胎牛血清。

项4.一种人肝前体细胞，是通过将人成熟肝细胞在含有血清、A-83-01和CHIR99021的培养基中进行培养而制备的。

项5.一种成熟肝细胞，是由项4所述的人肝前体细胞诱导而得的。

项6.一种被检物质的筛选方法，包括使用项5所述的成熟肝细胞。

项7.一种肝炎病毒的培养方法，包括使用项5所述的成熟肝细胞。

项8.一种人肝脏模型动物，是将项5所述的成熟肝细胞移植于非人哺乳动物而得的。

项9.一种试剂盒，是用于使用人肝前体细胞或成熟肝细胞来评价被检物质的代谢和/或肝毒的试剂盒，