[发明专利]用于处理滚环扩增产物的方法

说明书

本公开尤其提供了一种用于处理包含滚环扩增(RCA)产物的膜的方法。在一些实施例中，此方法可包含：(a)获得多孔毛细管膜，其包含在所述膜内或所述膜上的荧光标记的RCA产物；(b)将可固化聚合物沉积在所述膜上；和(c)固化所述可固化聚合物以将所述RCA产物包封在固体中。在一些实施例中，所述可固化聚合物可以是硅氧烷并且在其固体形式下可以为透明的。还提供了用于进行所述方法的试剂盒和由所述方法制得的组合物。

交叉引用

本申请要求2016年10月27日提交的第62/413,762号临时申请的权益，所述申请以全文引用的方式并入本文中。

背景技术

可以通过将探针与核酸样品杂交、使与靶序列杂交的探针环化、使用滚环扩增(RCA)扩增环化的探针和量化RCA产物的数量来实施几种基于核酸的诊断测试。

在这些方法中，RCA产物可以以各种不同方式量化。举例来说，理论上，RCA产物可以通过标记RCA产物、将样品沉积到玻璃载片表面上，以及计数载片上标记的产物的数量来量化。然而，只要将含有标记的RCA产物的溶液放在玻璃载片上，使标记的RCA产物扩散到表面，且然后计数附接到载片上的标记的RCA产物的数量需要几个小时而不是所有标记的RCA产物到达载片并计数。通过过滤器过滤RCA产物且然后计数通过过滤器捕获的标记的RCA产物的数量，可以在很大程度上解决这些问题。然而，在一些情况下以稳健的方式实施这种方法可能是具有挑战性的，因为许多荧光标记在其与空气接触时会迅速降解。此外，如果过滤器被润湿，RCA产物可以四处移动。这些挑战使得难以以高通量方式实施这些方法，特别是当样品必须物理移动(例如，倒置或旋转)时，不能总是立即进行分析，或者需要重新分析样品。

相信本公开提供了一种对这些问题的解决方案。

发明内容

本公开尤其提供了一种用于处理包含滚环扩增(RCA)产物的膜的方法。在一些实施例中，所述方法可包含：(a)获得多孔毛细管膜，其包含在膜内或膜上的荧光标记的RCA产物；(b)将可固化聚合物沉积在膜上；和(c)固化可固化聚合物以将RCA产物包封在固体中。在一些实施例中，可固化聚合物可以是硅氧烷并且在其固体形式下可以为透明的。还提供了用于进行所述方法的一种试剂盒和由所述方法制得的一种组合物。

将RCA产物包封在固体中(与使用液体或不使用液体相反)被认为是“固定”RCA产物，即将RCA产物固定在过滤器上，并且还防止荧光标记的RCA产物被外界空气氧化(即降解)。因此，通过将RCA产物包封在固体中，包含标记的RCA产物的过滤器可以在多个方向上快速移动(例如，倒置、旋转或传输)和/或储存很长一段时间(例如，数周、数月或甚至几年)。因此，本方法可以促进在工作流程中分析RCA产物，所述工作流程涉及在分析(例如，通过机器人)之前或在其中RCA产物不能总是立即量化的工作流程中快速多向移动过滤器。另外，本方法可以在其中可能需要在很长一段时间之后重新分析过滤器的工作流程中使用。

鉴于以下描述，这些和其它潜在特征和优点可能变得显而易见。

附图说明

所属领域技术人员将理解，下面描述的附图仅用于说明目的。附图并非旨在以任何方式限制本教示的范围。

图1示意性地示出了本方法的一些步骤。

图2为显示实例1中描述的一些实验结果的直方图。

图3为相对于细胞系混合物组成的两个通道的计数之间的比率的图。

具体实施方式

在描述各种实施例之前，应理解，本公开的教示不限于所描述的特定实施例，并且因此当然可以改变。还应了解，本文中所用的术语仅出于描述特定实施例的目的，且不旨在为限制性的，因为本教示的范围仅由所附权利要求书限制。