[发明专利]维持细胞存活率的组合物和方法

说明书

本发明提供了包含明胶的稳定细胞的介质。所述稳定细胞的介质有助于维持细胞存活率，例如在将冷冻保存后的生物材料解冻之后。

相关申请的交叉引用

本申请要求美国临时申请号62/404,170(2016年10月4日提交)和62/405,477(2016年10月7日提交)的优先权，其全部内容通过引用并入本发明。本申请还涉及2017年10月4日提交的名称为“用于细胞冷冻保存的组合物和方法”的国际申请号PCT/CN2017/，其全部内容通过引用并入本发明。

技术领域

本发明主要涉及在体外维持生物材料的存活率的领域。更具体地说，本发明涉及用于在冷冻保存之后解冻时维持生物材料(例如：细胞以及组织)的存活率的组合物和方法。

背景技术

0℃或0℃以下的冷冻保存技术通常用于长期保存生物材料，例如：动物和植物的细胞和组织(包括人类细胞和组织)。请参阅Thompson等人,Cryopreservation andThawing of Mammalian Cells,December 2014,eLS,John Wiley&Sons,Ltd:Chichester.DOI:10.1002/9780470015902.a0002561.pub2。有效长期储存哺乳动物细胞对于可否将这些细胞成功的应用于临床和作为研究工具是至关重要的。举例来说，干细胞可应用于细胞移植、组织工程和再生医学。而冷冻保存的卵母细胞、精子和胚胎则可用于辅助生殖技术。在移植医学中，需要冷冻保存皮肤、眼角膜、胰岛和心脏瓣膜等活体组织。

细胞可保存于零度以下(例如：-70℃以下)达数月或数年。然而，细胞于解冻时以及解冻后并不稳定。主要由存活率表示的细胞稳定性随着细胞在解冻过程期间和之后接触的环境而变化。已经显示，解冻速率、渗透应力以及冷冻保护剂的毒性会在解冻后损伤细胞。请参阅Thompson等人,Cryopreservation and Thawing of Mammalian Cells,December 2014,eLS,John Wiley&Sons,Ltd:Chichester.DOI:10.1002/9780470015902.a0002561.pub2。如果将所述细胞注射入受试者中(例如：通过细胞治疗、输血或骨髓移植等方式)，则如何于解冻后获得较高细胞存活率是非常重要的，因为再注射死亡或损伤的细胞是无效的。同样地，当细胞必须被重新培养时，高的细胞存活率同样也是重要的。

当细胞从冷冻状态转变为代谢活性状态时，如何维持其存活率是一项具有挑战性的任务。因此，有必要改进用于维持解冻后的细胞存活率的介质和方法。

发明内容

本发明提供一种含有约5wt％至约15.7wt％、约5wt％至约7.5wt％、约10wt％至约15.7wt％、约0.8wt％至约15.7wt％、约2.4wt％至约7wt％或者约9.3wt％至约14.6wt％明胶的稳定细胞的介质(前述的百分比为相对于稳定细胞的介质的总重量百分比)。

本发明还提供一种组合物，其包含生物材料(例如：一个或多个细胞、组织、器官和/或病毒颗粒)以及含有约0.8wt％至约15.7wt％、约2.4wt％至约7wt％或者约9.3wt％至约14.6wt％的明胶。

在一些实施方案中，生物材料(例如：一个或多个细胞、组织、器官和/或病毒颗粒)已经从冷冻保存状态解冻。在一些实施方案中，解冻后的细胞存活率至少为70％或至少为80％。

本发明提供一种用于维持生物材料存活率(例如：细胞存活率)的方法，该方法包括：将生物材料(例如：一个或多个细胞、组织、器官和/或病毒颗粒)与稳定细胞的介质混合以形成混合物(或形成稳定细胞的介质和生物材料(例如：一个或多个细胞、组织、器官和/或病毒颗粒)的组合)。