[发明专利]琼脂糖填充的陶瓷磷灰石

说明书

提供了聚合物填充的陶瓷磷灰石及其用途。

本申请要求2016年9月29日提交的美国临时申请62/401,560的权益，该申请通过引用整体并入本文。

背景技术

目前，从较小杂质中纯化病毒，与大颗粒偶联的蛋白质和其他生物大分子涉及使用多种分离方法，包括但不限于尺寸排阻色谱(SEC)，离子交换色谱(IEX)，疏水相互作用色谱(HIC)和/或离心。SEC要求填充昂贵的尺寸排阻树脂的大柱，低流速和有限的样品载量。IEX和HIC的选择性有限。离心仅可应用于与悬浮生物分子的培养基相比相对致密的生物大分子。

发明内容

本文提供包含不溶性多孔聚合物的陶瓷磷灰石珠。在一些实施方式中，聚合物是琼脂糖。在一些实施方式中，琼脂糖不是交联的。在一些实施方式中，琼脂糖的浓度范围为约1％至约8％。

在一些实施方式中，陶瓷磷灰石是陶瓷羟基磷灰石。

还提供了一种色谱柱，其包含含有不溶性多孔聚合物的多个陶瓷磷灰石珠，例如，如上文或本文其他地方所述。

还提供了制备含有不溶性多孔聚合物的陶瓷磷灰石珠的方法，例如，如上文或本文其他地方所述。在一些实施方式中，该方法包括在加热的聚合物溶液中孵育陶瓷磷灰石；并且将具有陶瓷磷灰石的加热的聚合物溶液冷却至约4℃至约30℃之间，以在陶瓷磷灰石的孔内形成不溶性多孔聚合物凝胶。在某些实施方式中，孵育步骤使聚合物吸收或以其他方式进入陶瓷磷灰石的孔中。在一些实施方式中，加热的聚合物溶液的温度为约100℃。在某些实施方式中，加热的聚合物溶液包含足够浓度的聚合物以进一步涂覆陶瓷磷灰石的外表面。在一些实施方式中，聚合物是琼脂糖，并且琼脂糖的浓度大于约1％，2％，3％或4％。在一些实施方式中，琼脂糖的浓度为约4％。在一些实施方式中，在冷却步骤之前除去过量的聚合物。在某些实施方式中，孵育步骤包括在搅拌下将加热的有机溶剂和非离子洗涤剂加入到加热的聚合物溶液中。在一些实施方式中，有机溶剂至少部分地与水不混溶并且相对于加热的聚合物溶液中的聚合物是化学惰性的。在一些实施方式中，有机溶剂是异链烷烃(例如Isopar H)。在一些实施方式中，加热的有机溶剂的温度为约60℃至约80℃。在一些实施方式中，非离子型洗涤剂选自脱水山梨糖醇衍生物，乙氧基化烷基酚和聚乙氧基化酯。在一些实施方式中，脱水山梨糖醇衍生物是脱水山梨糖醇酯(例如司盘80)或聚乙氧基化脱水山梨糖醇酯。

还提供了进行色谱法的方法。在一些实施方式中，该方法包括使包含靶分子的样品在使该靶标不被陶瓷磷灰石珠捕获的条件下与包含不溶性多孔聚合物的多个陶瓷磷灰石珠接触，所述陶瓷磷灰石珠例如本文所述；并从陶瓷磷灰石珠中收集靶分子。在一些实施方式中，样品包含被陶瓷磷灰石珠捕获的污染物。在一些实施方式中，靶分子是蛋白质-纳米颗粒偶联物，并且污染物是游离的(未偶联的)蛋白质。在一些实施方式中，样品包含蛋白质-纳米颗粒偶联物，游离蛋白质和缓冲剂。在一些实施方式中，样品还包含表面活性剂(例如，聚亚烷基二醇或Pluronic F-68)。在某些实施方式中，收集步骤包括从陶瓷磷灰石珠中收集富含靶分子的一个或多个级分。在一些实施方式中，收集步骤包括向陶瓷磷灰石珠施加离心力或真空，并从陶瓷磷灰石珠中收集富含靶分子的一个或多个级分。在一些实施方式中，所述蛋白质是抗体。在一些实施方式中，所述蛋白质是IgG抗体。在某些实施方式中，蛋白质-纳米颗粒偶联物是蛋白质-聚合物点偶联物。在一些实施方式中，样品还包含游离纳米颗粒，并且陶瓷磷灰石珠将游离纳米颗粒与偶联物分离。

附图说明图1是显示标准陶瓷羟基磷灰石(CHT)和琼脂糖填充的CHT的相似选择性的重叠色谱图。

发明详述

本发明人已经发现了一种具有多模式特性的新型聚合物填充陶瓷磷灰石，即尺寸排阻模式和捕获模式。本发明人还发现可以将不溶性多孔聚合物引入陶瓷磷灰石中而不显著影响陶瓷磷灰石选择性或结合能力。

定义