[发明专利]使用经掩蔽的半抗原在福尔马林固定的石蜡包埋的组织中的蛋白邻近测定法

权利要求书

1.一种用于分析福尔马林固定的石蜡包埋的(FFPE)样品以确定所述FFPE样品中的第一蛋白靶标是否与所述FFPE样品中的第二蛋白靶标邻近的方法，所述方法包括：

(a) 使所述FFPE样品与第二暴露的酶-抗体缀合物接触，以形成第二蛋白靶标-暴露的酶-抗体缀合物复合物，其中所第二暴露的酶-抗体缀合物的暴露的酶选自碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、酰胺酶、尿素酶、神经氨酸酶、β-葡萄糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖醛酸糖苷酶、脂肪酶、硫酸酯酶和氧化还原酶；

(b) 使所述FFPE样品与第一经掩蔽的半抗原-抗体缀合物接触，以形成第一蛋白靶标-经掩蔽的半抗原-抗体缀合物复合物；

(c) 使所述第一蛋白靶标-经掩蔽的半抗原-抗体缀合物复合物的经掩蔽的半抗原暴露，以形成第一蛋白靶标-暴露的半抗原-抗体缀合物复合物；

(d) 使所述FFPE样品与第一检测试剂接触，以标记所述第一蛋白靶标-暴露的半抗原-抗体缀合物复合物或所述第一蛋白靶标；和

(e) 检测所述经标记的第一蛋白靶标-暴露的半抗原-抗体缀合物复合物或经标记的第一蛋白靶标，

其中所述第一经掩蔽的半抗原-抗体缀合物具有式(IVC)或(IVD)的结构：

其中

“抗体”是抗体；

“半抗原”是半抗原，其选自吡唑类、硝基苯基化合物类、苯并呋咱类、苯并呋喃类、三萜类、脲类、硫脲类、鱼藤酮、噁唑类、噻唑类、香豆素、硝基芳基类、环木酚素类、生物素、地高辛配基、荧光素、2-羟基喹喔啉和二硝基苯酚；

A是基团，所述基团包含分支的或未分支的、被取代的或未被取代的、饱和的或不饱和的具有1-15个碳原子的脂族基团，并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子；

W是6元被取代的或未被取代的芳族环或杂环基团；

Z是键或基团，所述基团包含分支的或未分支的、被取代的或未被取代的、饱和的或不饱和的具有1-30个碳原子的脂族基团，并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子，

每个R¹独立地选自H、-O-甲基、-O-乙基、-O-正丙基、-O-异丙基; -O-正丁基、-O-仲丁基或-O-异丁基；具有1-4个碳原子的-S-烷基；

V是键、被取代的或未被取代的具有1-4个碳原子的烷基、或被取代的或未被取代的-O-烷基，其中所述烷基或-O-烷基被C₁-C₄烷基取代；

R³是酶底物，其选自磷酸基团、酯基、酰胺基、硫酸基团、糖苷基团、脲基团和硝基；

n是在1-25范围内的整数，且

q是1；

s是在1-2范围内的整数；且

t是1。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一检测试剂包含(i)对所述第一蛋白靶标-暴露的半抗原-抗体复合物的暴露的半抗原具有特异性的第二抗体，所述第二抗体缀合至第一酶，使得所述第二抗体用所述第一酶标记所述第一蛋白靶标-暴露的半抗原-抗体复合物；和(ii)所述第一酶的第一底物。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一底物是生色底物或荧光底物。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一检测试剂包括扩增组分以用多个第一报告物部分标记所述第一蛋白靶标-暴露的半抗原-抗体缀合物复合物的暴露的半抗原。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述多个第一报告物部分是半抗原。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述第一检测试剂进一步包含对所述多个第一报告物部分具有特异性的第二抗体，每个第二抗体缀合至第二报告物部分。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述第二报告物部分选自扩增酶或荧光团。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述第二报告物部分是扩增酶，且其中所述第一检测试剂进一步包含所述扩增酶的第一生色底物或荧光底物。