[发明专利]人类耳祖细胞鉴定和分离

权利要求书

1.一种鉴定混合细胞群中的人耳祖细胞的方法，其包括确定细胞是否具有至少两种选自以下的细胞表面标志物：SSEA1、GD3、TRA-2-49、SSEA4、GD2和CD141，其中细胞标志物SSEA1、GD3、TRA-2-49、SSEA4和GD2是阳性细胞标志物，并且

其中细胞标志物CD141是阴性细胞标志物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中组合使用至少两种阳性细胞标志物以鉴定人耳祖细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其中组合使用至少三种阳性细胞标志物以鉴定人耳祖细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其中组合使用至少四种阳性细胞标志物以鉴定人耳祖细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其中组合使用至少五种阳性细胞标志物以鉴定人耳祖细胞。

6.根据权利要求1所述的方法，其中一种阳性细胞标志物，或至少两种阳性细胞标志物与阴性细胞标志物CD141组合使用。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述混合细胞群由体外多能干细胞分化方案提供或在其期间提供；或者

其中所述混合细胞群由去分化、反式分化或直接重编程成人耳细胞谱系提供或在其期间提供；或者

其中所述混合细胞群由组织提供。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述体外多能干细胞为人胚胎干细胞(hESC)或诱导多能干细胞(iPSC)。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述组织为发育中的胎儿内耳组织，或从成人内耳的外科手术干预获得的耳蜗或前庭样品。

10.根据权利要求1所述的方法，其中使所述混合细胞群与一个或多个被布置成与细胞标志物结合的结合成员接触。

11.根据权利要求10所述的方法，其中结合成员包括抗体、抗体片段或其模拟物。

12.根据权利要求1所述的方法，其包括检测步骤，其中检测所述细胞标志物是否存在于细胞或细胞群上。

13.根据权利要求10所述的方法，其中所述结合成员带有标记用于鉴定。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述标记包含荧光团。

15.根据权利要求12所述的方法，其中检测包括使用FACS和/或使用MACS。

16.一种鉴定混合细胞群中的人耳祖细胞的方法，其使用至少两种选自以下的细胞表面标志物：SSEA1、GD3、TRA-2-49、SSEA4、GD2和CD141，所述方法包括：

-提供对至少两种不同细胞标志物特异的结合成员；

-将混合细胞群与结合成员接触；和

-检测结合成员与混合细胞群中的细胞的结合或非结合；

其中细胞标志物SSEA1、GD3、TRA-2-49、SSEA4和GD2是阳性细胞标志物，并且其中细胞标志物CD141是阴性细胞标志物。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述方法还包括：如果符合下列情况，则确定细胞是人耳祖细胞：

a)被布置成与阳性细胞标志物结合的结合成员与细胞上的至少两种不同的阳性细胞标志物结合；或者

b)被布置成与阳性细胞标志物中的一种结合的结合成员与细胞上的至少一种阳性细胞标志物结合，并且被布置为与阴性细胞标志物CD141结合的结合成员不与细胞结合。