[发明专利]使用DTBP浓缩微生物或提取核酸的方法

说明书

本发明涉及使用DTBP的用于浓缩微生物和提取核酸的方法。已经开发了能够使用DTBP浓缩微生物的技术，并且还已经开发了能够从浓缩的微生物中直接提取核酸的方法。由于浓缩微生物和提取核酸的技术可以在一个管或芯片中实现，因此期望显著减少来自外部的污染、成本、时间、复杂性等。

技术领域

本发明涉及使用3,3’-二硫代双丙亚氨酸二甲酯(dimethyl 3,3’-dithiobispropionimidate)浓缩微生物或提取核酸的方法。

背景技术

核酸是用于检查疾病状态的重要分析工具。脱氧核糖核酸(DNA)生物标志物(如单核苷酸多态性(SNP)、突变或DNA甲基化)帮助研究人员找到癌症的原因，并为在疾病初期阶段诊断和观察疾病状态以及预后和监测疾病状态提供重要机会提供重要线索。

由于与其它成分(如蛋白质)相比，核酸(如DNA)以非常低的生理浓度存在(例如，每微升全血中，相对于数十微克蛋白质存在数十纳克DNA)，从临床样品中有效提取和预浓缩DNA对于后续过程(如扩增和检测过程)非常重要。

在现有的检测微生物的方法中，使用1ml-2ml患者样品溶液中的一部分(而不是全部)提取核酸，并使用所提取的核酸进行检测。在存在大量微生物的情况下没有大问题。然而，在存在少量微生物的情况下，可能无法准确地检测微生物，因此在调控其它传染病方面可能存在问题。因此，需要研究出一种浓缩方法，通过该浓缩方法来尽可能多地使用1ml-2ml样品中的所有微生物。

此外，由于最近在包括生物技术、诊断学、药理学以及代谢组学在内的各种领域中对高度纯化的核酸的需求已经增加，已经尝试更快速地从各种生物样品分离具有更高纯度的核酸。

然而，迄今为止，在分离核酸的方法中进展最大的部分是关于从包含在细胞裂解液中的各种物质(如基因组DNA、质粒DNA、信使RNA、蛋白质以及细胞碎片)中特异性吸附核酸的载体的技术。几乎所有开发分离核酸的方法的研究都集中在吸附核酸的物质的研究和开发上。

因此，为了更快速地分离具有更高纯度的核酸，迫切需要开发能够从细胞碎片、变性蛋白质聚集体以及细胞裂解物中的其它各种物质中仅分离所需核酸的技术。

发明内容

[技术问题]

本发明旨在提供一种用于浓缩微生物的组合物以及使用所述组合物的用于浓缩微生物的方法和试剂盒，所述组合物包含3,3’-二硫代双丙亚氨酸二甲酯(下文中称为“DTBP”)作为活性成分；一种用于提取核酸的组合物以及使用所述组合物的用于提取核酸的方法和试剂盒，所述组合物包含DTBP作为活性成分；以及，一种用于浓缩微生物和提取核酸的组合物以及使用所述组合物的用于浓缩微生物并同时从所浓缩的微生物中提取核酸的方法和试剂盒，所述组合物包含DTBP作为活性成分。

[技术方案]

为了解决上述问题，本发明提供了用于浓缩微生物的组合物，所述组合物包含3,3’-二硫代双丙亚氨酸二甲酯(DTBP)作为活性成分。

此外，本发明提供了用于浓缩微生物的试剂盒，所述试剂盒包含所述组合物。

此外，本发明提供了浓缩微生物的方法，所述方法包括使包含微生物的样品和DTBP彼此接触。

此外，本发明提供了用于提取核酸的组合物，所述组合物包含DTBP作为活性成分。

此外，本发明提供了用于提取核酸的试剂盒，所述试剂盒包含所述组合物。

此外，本发明提供了提取核酸的方法，所述方法包括：通过将胺基引入对象物中来将所述对象物改性(步骤1)；将核酸样品和DTBP注射到经改性的所述对象物上，并形成所述核酸和所述DTBP的复合物(步骤2)；以及通过用洗脱缓冲液处理所述对象物(在所述对象物上形成所述复合物)来提取所述核酸(步骤3)。