[发明专利]工程化的葡糖基转移酶

权利要求书

1.一种非天然葡糖基转移酶，该非天然葡糖基转移酶在与SEQ ID NO：62的氨基酸残基Leu-373、Leu-428、Ala-472、Ala-510、Leu-513、Met-529、Phe-607、Asn-613、Gln-616、Ser-631、Gly-633、Phe-634、Thr-635、或Phe-951相对应的位置处包含至少一个氨基酸取代，

其中该非天然葡糖基转移酶合成包含1，3-键和/或1，6-键的α-葡聚糖，并且

其中该非天然葡糖基转移酶具有：

(i)比第二葡糖基转移酶的α-葡聚糖产率更高的α-葡聚糖产率，该第二葡糖基转移酶仅在一个或多个取代位置处与该非天然葡糖基转移酶不同，和/或

(ii)比该第二葡糖基转移酶的明串珠菌二糖产率更低的明串珠菌二糖产率。

2.如权利要求1所述的非天然葡糖基转移酶，其中：

(i)在与氨基酸残基Leu-373相对应的位置处的氨基酸被Gln、Ala、Val、Met、Phe或Leu残基取代；

(ii)在与氨基酸残基Leu-428相对应的位置处的氨基酸被Val残基取代；

(iii)在与氨基酸残基Ala-472相对应的位置处的氨基酸被Ser或Cys残基取代；

(iv)在与氨基酸残基Ala-510相对应的位置处的氨基酸被Glu、Ile、Val或Asp残基取代；

(v)在与氨基酸残基Leu-513相对应的位置处的氨基酸被Tyr、Phe或Trp残基取代；

(vi)在与氨基酸残基Met-529相对应的位置处的氨基酸被Leu或Asn残基取代；

(vii)在与氨基酸残基Phe-607相对应的位置处的氨基酸被Trp、Tyr或Asn残基取代；

(viii)在与氨基酸残基Asn-613相对应的位置处的氨基酸被Val、Ile、Thr、Gly、Met或Leu残基取代；

(ix)在与氨基酸残基Gln-616相对应的位置处的氨基酸被Glu残基取代；

(x)在与氨基酸残基Ser-631相对应的位置处的氨基酸被Thr、Asp、Glu或Arg残基取代；

(xi)在与氨基酸残基Gly-633相对应的位置处的氨基酸被Trp残基取代；

(xii)在与氨基酸残基Phe-634相对应的位置处的氨基酸被Ala残基取代；

(xiii)在与氨基酸残基Thr-635相对应的位置处的氨基酸被Trp、His或Tyr残基取代；或

(xiv)在与氨基酸残基Phe-951相对应的位置处的氨基酸被Tyr残基取代。

3.如权利要求1所述的非天然葡糖基转移酶，该非天然葡糖基转移酶包含两个或更多个氨基酸取代，其中所述取代中的至少一个在与SEQ ID NO：62的氨基酸残基Leu-373、Leu-428、Ala-472、Ala-510、Leu-513、Met-529、Phe-607、Asn-613、Gln-616、Ser-631、Gly-633、Phe-634、Thr-635或Phe-951相对应的位置处。

4.如权利要求3所述的非天然葡糖基转移酶，该非天然葡糖基转移酶在与SEQ ID NO：62的氨基酸残基Ala-510或Phe-607相对应的位置处包含至少一个氨基酸取代。

5.如权利要求4所述的非天然葡糖基转移酶，该非天然葡糖基转移酶在与SEQ ID NO：62的氨基酸残基Ala-510和Phe-607相对应的位置处包含氨基酸取代。

6.如权利要求1所述的非天然葡糖基转移酶，其中该α-葡聚糖是不溶性的并且包含至少约50％的α-1，3键，并且任选地其中该α-葡聚糖具有至少100的重均聚合度(DP_w)。

7.如权利要求6所述的非天然葡糖基转移酶，该非天然葡糖基转移酶包含与SEQ IDNO：4的残基55-960、SEQ ID NO：65的残基54-957、SEQ ID NO：30的残基55-960、SEQ ID NO：28的残基55-960、或SEQ ID NO：20的残基55-960具有至少约90％同一性的催化结构域。