[发明专利]苹果酸脱氢酶

权利要求书

1.一种重组酵母宿主细胞，其能够生产二羧酸并且包含编码具有苹果酸脱氢酶活性的突变多肽的核酸序列，其中所述突变多肽在所述宿主细胞的胞质中表达，并且其中与在相同条件下培养的表达SEQ ID NO: 39的重组宿主细胞相比，所述宿主细胞产生增加的二羧酸；

其中所述突变多肽的氨基酸序列为在SEQ ID NO: 39的基础上在第34至40位发生突变的序列，所述在第34至40位突变的氨基酸序列选自由以下序列组成的组：

2.一种根据权利要求1所述的重组宿主细胞，其中相较于在残基34处为D并且在残基36处为R的SEQ ID NO: 39，所述突变多肽的NADP(H)-依赖型活性与NAD(H)-依赖型活性之比提高。

3.根据权利要求2所述的重组宿主细胞，其中相较于在残基34处为D并且在残基36处为R的SEQ ID NO: 39，所述具有苹果酸脱氢酶活性的突变多肽的NAD(H)-依赖型活性和NADP(H)-依赖型活性均提高。

4.根据权利要求1所述的重组宿主细胞，其中所述重组酵母细胞选自Candida、Hansenula、Kluyveromyces、Pichia、Issatchenkia、Saccharomyces、Schizosaccharomyces或Yarrowia菌株的酵母细胞。

5.根据权利要求4所述的重组宿主细胞，其中所述酵母细胞是Saccharomyces cerevisiae。

6.根据权利要求1所述的重组宿主细胞，其中编码所述具有苹果酸脱氢酶活性的突变多肽的核酸序列在胞质中表达，并且所述具有苹果酸脱氢酶活性的突变多肽在胞质中有活性。

7.根据权利要求1所述的重组宿主细胞，其中所述重组宿主细胞还包含一个或多个拷贝的编码以下之中的一种或多种的核酸：磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸羧化酶、延胡索酸酶、延胡索酸还原酶和/或琥珀酸转运体。

8.一种生产二羧酸的方法，其中所述方法包括在适于生产所述二羧酸的条件下发酵根据前述权利要求中任一项所述的重组宿主细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，所述方法还包括从发酵培养基中回收所述二羧酸。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述二羧酸是琥珀酸、苹果酸和/或延胡索酸。