[发明专利]使用由不同的方式固定化抗原的抗原负载不溶性载体粒子的抗体测定法、抗体测定用试剂

说明书

本发明旨在提供扩展在负载抗原的乳胶等的不溶性载体粒子的抗体测定中的利用可能性的宽度，特别是，即使负载微生物来源的溶解物等的多种物质的混合物也得到良好的测定结果的手段，提供抗体测定方法，其特征在于，使含有由物理吸附负载指定的抗原的不溶性载体粒子及由化学结合负载所述抗原的不溶性载体粒子双方的不溶性载体粒子的含有液与从可含有目标抗体的生物体分离的样品接触而检测由负载在所述载体粒子的抗原和所述样品中的目标抗体的抗原抗体反应的所述载体粒子的凝集反应。

【技术领域】

本发明是涉及生物体物质的测定方法的发明，再具体而言，是涉及用不同的方式固定化抗原的抗原负载不溶性载体粒子、例如，抗原负载乳胶粒子、将彼此混合使用的抗体的测定手段的发明。

【背景技术】

现在，在使用不溶性载体粒子的诊断药中，特别是通用作为免疫学测定方法之一使用乳胶凝集法的试剂。

在乳胶凝集法中，在液相中使用负载抗原或抗体(coated或coupled)乳胶，形成检测抗体或抗原的测定系统。可基于由免疫复合物的形成而凝集乳胶粒子的性质，将凝集的程度由目测确认，或光学地进行以浊度的增加作为吸光度或散射光强度的变化测定(以下，也称为乳胶法：专利文献1)。

ELISA等的夹心免疫测定法的测定本身是正确的，能作为基准法使用，但由于在测定的过程中包括除去测定样品中所含的被测定物质以外的成分或测定试剂中的成分的清洗工序，有测定要求长时间，测定操作烦琐这样的缺点。因此，不适宜于短时间内的多数的测定试样的测定。

与此相比，乳胶法的操作简便，容易向在临床检查中广泛使用的通用的生物化学自动分析装置的应用，能在短时间内的测定和多数的受试试样的测定。

从而，在多个临床检查项目中，使用乳胶法。

【现有技术文献】

【专利文献】

专利文献1：特开昭53-62826号公报

发明的公开

【发明要解决的课题】

在本发明中，以在使用负载抗原的乳胶等的不溶性载体粒子的抗体测定中扩大测定范围，及灵敏度和特异性的提升作为课题。特别是，进行即使负载微生物来源的溶解物等的多种物质的混合物，也得到良好的测定结果的手段的提供。

在使用不溶性载体粒子的诊断药的开发时，负载在不溶性载体粒子的物质的分子量或负载方式的选择对其性能有大影响。

例如，在使用物理吸附法时，即，在利用不溶性载体粒子和负载蛋白质的静电的相互作用(疏水相互作用)而由直接的接触向不溶性载体粒子负载蛋白质等时，适宜于比较高分子量的物质的负载。但是，有在低分子量的物质或半抗原的负载中可发生在不溶性载体表面的埋没，或由用于抑制非特异性的凝集的封闭剂的埋没这样的难点。另外，物理吸附法在疏水性氨基酸残基非常地缺乏的蛋白质的负载上也确认到难点。

在使用化学结合法时，即，在由将不溶性载体粒子或蛋白质表面的羧基和氨基由碳二亚胺等的偶联试剂共价键合的方法、使不溶性载体粒子表面的醛基或甲苯磺酰基等和蛋白质的氨基结合的方法等向不溶性载体粒子负载蛋白质等时，对于物理的吸附法有难点的低分子量的蛋白质或半抗原的负载也比较容易。再者，在使用化学结合法时，通过适宜选择不溶性载体的官能团，能进行形成共价键的蛋白质侧的结合部位侧的控制、即，选择蛋白质侧的结合部位(共价键合的氨基酸残基)。但是，确认到官能团缺乏蛋白质(换言之，疏水性高的蛋白质)的负载困难这样的问题，再者，所述负载粒子的制作工序烦琐，也确认负载蛋白质的变性的问题。