[发明专利]抗体融合蛋白的制造方法

权利要求书

1.一种制造方法，其为使抗体与人艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(人I2S)融合而成的融合蛋白的制造方法，其包括：

(a)将产生该融合蛋白的哺乳动物细胞在无血清培养基中进行培养，使该融合蛋白分泌到培养液中的步骤；

(b)通过从该培养液中除去该哺乳动物细胞而回收培养上清的步骤；以及

(c)使用柱色谱从该培养上清中纯化出该融合蛋白的步骤，

在该步骤(c)中使用的柱色谱仅为3种，并且，在该步骤(c)中，依次利用使用结合有对该融合蛋白具有亲和性的物质的材料作为固相的柱色谱、使用对磷酸基具有亲和性的材料作为固定相的柱色谱、以及尺寸排阻柱色谱这3种柱色谱，对该融合蛋白具有亲和性的物质为选自由蛋白A、蛋白G、蛋白L、蛋白A/G、该抗体的抗原、将该抗体作为抗原进行识别的抗体、以及该人I2S的抗体组成的组中的物质，

该抗体为人源化抗hTfR抗体，该融合蛋白为选自由以下的(i)～(iii)组成的组中的蛋白质：

(i)由具有序列号6所表示的氨基酸序列的人源化抗hTfR抗体的轻链和在具有序列号7所表示的氨基酸序列的人源化抗hTfR抗体的重链的C末端侧经由接头序列(Gly-Ser)结合序列号5所表示的人艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶而成的蛋白质构成的融合蛋白；

(ii)由具有序列号8所表示的氨基酸序列的人源化抗hTfR抗体的轻链和在具有序列号9所表示的氨基酸序列的人源化抗hTfR抗体的重链的C末端侧经由接头序列(Gly-Ser)结合序列号5所表示的人艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶而成的蛋白质构成的融合蛋白；以及

(iii)由具有序列号10所表示的氨基酸序列的人源化抗hTfR抗体的轻链和在具有序列号11所表示的氨基酸序列的人源化抗hTfR抗体的重链的C末端侧经由接头序列(Gly-Ser)结合序列号5所表示的人艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶而成的蛋白质构成的融合蛋白。

2.如权利要求1所述的制造方法，其中，对磷酸基具有亲和性的该材料为氟磷灰石或羟基磷灰石中的任意一种。

3.如权利要求1的制造方法，其中，对磷酸基具有亲和性的该材料为羟基磷灰石。