[发明专利]经改造的流感血凝素多肽的修饰

权利要求书

1.一种改变经改造的血凝素(HA)多肽的免疫原性谱的方法，其包括

a)鉴定经改造的HA多肽的头区中一个或多个推定的N联糖基化位点的存在或不存在，其中所述头区是所述经改造的HA多肽在对应于根据California 09编号(CA09编号)的SEQID NO:1的残基63-278、125-277或135-269的位置上的片段；

b)将一个或多个氨基酸取代、缺失或插入引入经改造的HA多肽的头区内，以破坏一个或多个推定的N联糖基化位点或插入另外的N联糖基化位点，从而生成与所述经改造的HA多肽相比，具有改变的免疫原性谱的经再改造的HA多肽；并且

c)在所述经改造的HA多肽的受体结合位点(RBS)区域或者邻近所述经改造的HA多肽的受体结合位点(RBS)区域引入将一个或多个氨基酸取代，和/或将赖氨酸(K)或精氨酸(R)残基的插入引入结合所述经改造的HA多肽的RBS的一个或多个环内。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述经再改造的HA多肽包含在NxS/Ty共有序列的1-5个氨基酸内插入的赖氨酸(K)或精氨酸(R)残基。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述RBS包含在三维(3-D)结构中根据CA09编号对应于残基W167的位置的15埃内的所有氨基酸残基。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述RBS包含由单克隆抗体CH65的互补位结合的表位。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述一个或多个推定的N联糖基化位点或另外的N联糖基化位点由NxS/Ty的共有序列限定，其中x和y不是脯氨酸(P)。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述一个或多个推定的N联糖基化位点位于对应于根据CA09编号的SEQ ID NO:1的位置142-145和/或177-179的位置。

7.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述一种或多种氨基酸取代、缺失或插入以破坏一个或多个推定的N联糖基化位点包括将共有序列NxS/Ty修饰为z¹z²z³z⁴，其中

z¹是N、D、K或S；

z²是Y或不变；

z³是E、D或N；和

z⁴是I、L、P、S或T，或者不变。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述经再改造的HA多肽的免疫原性谱是比所述经改造的HA多肽更大流行性的。

9.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述经再改造的HA多肽的免疫原性谱是比所述经改造的HA多肽更季节性的。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述经再改造的HA多肽包含在对应于根据CA09编号的残基137、144、145、154、155、156、157、158、159、177、210、211、212、213、214、244、245和/或262的位置上的一种或多种氨基酸取代、缺失或插入。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述经再改造的HA多肽包含在对应于根据CA09编号的残基137、144、145、154、155、156、157、158、159、177、210、211、212、213和/或214的位置上的一种或多种氨基酸取代、缺失或插入。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其还包括评价所述经再改造的HA多肽的表达和构象。