[发明专利]重组蛋白的生产方法

说明书

本发明涉及一种重组蛋白的生产方法，其为使用在诱导型启动子的调控下表达重组蛋白的重组细胞的该重组蛋白的生产方法，其中，包括在使重组细胞增殖后的培养液的一部分中添加新鲜的培养基并连续地进行培养的步骤，不重复使用诱导了重组蛋白的表达的重组细胞。

技术领域

本发明涉及利用微生物进行的工业规模下的重组蛋白的生产方法。

背景技术

在重组蛋白的工业规模下的生产中采用流加培养、半连续培养和连续培养等培养方法。

流加培养也称为半分批培养。分批培养是在培养开始时预先将培养所需要的基质(营养源、培养基成分等)全部添加到培养基中的培养方法。与此相对，流加培养是在制备成适度的基质浓度的培养基中开始培养，然后逐次添加被消耗掉的各基质来进行补充的培养方法。分批培养和流加培养都是在培养结束之前不从培养槽(生物反应器)中去除培养液的培养方法。在基质以高浓度存在时会产生增殖抑制的培养系统中，流加培养能够通过将基质浓度控制为适当的低浓度而避免增殖抑制。还有通过流加培养能够进行高细胞密度培养的情况，能够高浓度地生产重组蛋白。作为流加基质的添加方法，已知有分批地逐次添加流加基质的方法、以恒定的流量添加流加基质的恒流量添加法(恒速流加法)、使流加基质的流量按指数函数增加而进行添加的指数流加法等。

连续培养是在保持培养液量恒定的同时，连续地进行新鲜培养基的流加和培养液的排出，在培养液中的培养基组成不随时间变化的稳态下进行培养的培养方法。连续培养中的细胞密度与流加培养中的细胞密度相比通常较低。另一方面，通过连续培养，能够持续地生产重组蛋白。

半连续培养是通过分批培养或流加培养得到特定的容量或生物质后，将包含重组蛋白的培养液的一部分从生物反应器中去除，同时向生物反应器中添加新鲜的培养基，由此持续重复进行重组蛋白的生产的方法(专利文献1)。

对于具有极大的弹性和回弹性、同时具有橡胶样的性质的节肢弹性蛋白和弹性蛋白、作为羊绒和羊毛的主要成分蛋白之一的角蛋白、为了对各种结缔组织赋予力学强度而发挥作用的胶原蛋白、轻柔且结实且具有独特光泽的蚕丝以及具有优良的强度和伸长率的蛛丝等结构蛋白，研究了来源于这些结构蛋白的重组蛋白的工业规模下的生产方法，但现状是，在实用化中还存在很多课题。即使对于全力进行了研究的蛛丝蛋白，生产水平也仍然较低，认为在细菌宿主中表达天然型蛛丝蛋白是低效的(非专利文献1、专利文献2)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2010-527239号公报

专利文献2：国际公开第2015/042164号

非专利文献

非专利文献1：Appl Microbiol Biotechnol.,1998年,49(1),pp.31-38.

发明内容

发明所要解决的问题

本发明的目的在于提供以工业规模高效地稳定生产重组蛋白的方法。

用于解决问题的方法

本发明人在对利用经转化的微生物通过连续培养进行重组蛋白的工业规模下的生产方法进行研究的过程中发现，通过不重复使用曾进行了表达诱导的该微生物，能够高效、稳定地高生产目的重组蛋白，从而完成了本发明。

即，本发明涉及例如以下的各发明。

[1]一种重组蛋白的生产方法，其为使用在诱导型启动子的调控下表达重组蛋白的重组细胞的该重组蛋白的生产方法，其中，

包括在使上述重组细胞增殖后的培养液的一部分中添加新鲜的培养基并连续地进行培养的步骤，

不重复使用诱导了上述重组蛋白的表达的重组细胞。