[发明专利]非整合病毒递送系统及其相关方法

说明书

公开了一种非整合病毒递送系统。该系统包括病毒运载体，其中所述病毒运载体包含缺陷型整合酶基因；异源性病毒附加型复制起点；编码至少一个起始蛋白的序列，所述至少一个起始蛋白对异源性病毒附加型复制起点具有特异性，其中表达编码至少一个起始蛋白的序列是诱导型的，所述至少一个起始蛋白对异源性病毒附加型复制起点具有特异性；以及至少一个基因、基因产物、shRNA、siRNA、miRNA或感兴趣的其他RNA。

相关申请的交叉引用

本申请要求下述的优先权：2016年6月8日提交的题为“非整合病毒递送系统和其使用方法”的美国临时专利申请号62/347,552、2016年12月8日提交的题为“非整合病毒递送系统及其相关方法”的美国临时专利申请号62/431,760和2016年12月12日提交的题为“非整合病毒递送系统及其相关方法”的PCT/US16/66185，其公开通过引用纳入本文。

技术领域

本公开一般涉及病毒载体和用于递送基因的系统，和其他治疗、诊断或研究用途的领域。更具体地，本公开的实施方式涉及非整合病毒载体和用于递送基因的系统，和其他治疗、诊断或研究用途。

背景

由于病毒载体特定的病毒包膜-宿主细胞受体相互作用和病毒的基因表达机制，病毒载体已经用于将基因和其他治疗性核酸构建体转导到靶细胞中。结果，病毒载体已被用作将基因转移到许多不同细胞类型中的载剂，包括但不限于分离的组织样品、原位组织靶标和培养的细胞系。在细胞中导入和表达外源基因的能力可用于基因表达的研究以及细胞系和途径的阐明，以及提供治疗干预的潜力，如基因疗法和各类免疫疗法。

已经提出包括慢病毒鼠逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒的一些病毒系统作为潜在的治疗性基因传递载体。然而，许多障碍阻碍了将它们作为批准的治疗剂的有效利用。研究和开发障碍包括但不限于，表达的稳定性和控制，基因组包装能力和构建体依赖性载体稳定性。另外，病毒载体的体内应用可受到针对病毒结构蛋白和/或转导的基因产物的宿主免疫应答的限制，这可导致有害的抗载体免疫学效应。

研究人员已经试图找到稳定的表达系统，以此作为克服这些障碍中的一些的方法。一种途径在这类表达系统中利用重组多肽或基因调节分子，包括小RNA。这些系统采用将转导的逆转录病毒基因组或其至少一部分染色体整合到宿主细胞的基因组中。对于这些途径的一个重要限制是基因整合的位点通常是随机的，并且在任何特定位点整合的基因数量和比例通常是不可预测的。因此，依赖于染色体整合的载体导致可能超过治疗间隔的重组基因的永久维持，并且不良控制质粒或其他非复制DNA并且可能在完成所需治疗间隔之前衰退。

另一种方法是使用瞬时表达系统。在瞬时表达系统下，感兴趣基因的表达基于非整合的质粒，并且因此表达通常会丢失，因为细胞后来经历分裂或质粒载体被内源性核酸酶破坏。因此，瞬时基因表达系统通常不会随时间导致充分的表达，并且通常需要重复治疗，这通常被理解为不期望的特征。

发明内容

提供了稳定的病毒递送系统和方法。在各方面，递送系统包括瞬时表达系统。根据一个方面，递送系统是非整合的。在另一方面，递送系统是非整合的和瞬时的。

在各方面和实施方式中，系统不同地包括一个或所有病毒运载体，其中，病毒运载体包含缺陷型整合酶基因；异源性病毒附加型DNA复制起点；编码对异源性病毒附加型DNA复制起点具有特异性的至少一个起始蛋白(initiator protein)的序列，其中，表达编码对异源性病毒附加型DNA复制起点具有特异性的至少一个起始蛋白的序列是诱导型的；以及至少一个基因、基因产物、shRNA、siRNA、miRNA或感兴趣的其他RNA。病毒运载体可以是慢病毒。异源性病毒附加型DNA复制起点可以来自乳头瘤病毒。异源性病毒附加型DNA复制起点可以来自人乳头瘤病毒或牛乳头瘤病毒。