[发明专利]使用纤维状物质的检测方法

说明书

提供一种抗原抗体间的反应速度高、可进行简便的B/F分离工序的测定系统。一种检测对象物质的检测方法，其包括下述工序：使a)与纤维状物质结合的第一识别物质、b)被标记的第二识别物质、及c)检测对象物质以分散状态接触；形成上述a、b、及c结合而成的复合物；将该复合物与未结合的b分离；对得到的该复合物的标记进行检测，其中，第一识别物质和第二识别物质都可以与检测对象物质结合。

技术领域

本发明涉及将纤维用于分子间相互作用的检测的检测系统。

背景技术

已知抗原与抗体的相互作用在抗原和抗体于溶液中均匀存在时，反应速度快。具有该优点的测定系统是均质测定系统，如果将抗原与抗体混合，则在极短时间内达到平衡状态，因此，通常在试剂混合后数分钟后就能开始测定的情况较多。目前为止，对这些测定系统报告了几种，代表性的是荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance EnergyTransfer，简称为“FRET”)。其原理为下述现象：某个荧光分子(以下简称为供体)的荧光光谱与另一个荧光分子(以下简称为受体)的激发光谱有重叠，它们接近至数纳米程度时，供体的荧光能量将受体激发，产生来自受体的荧光。以用二个抗体夹持抗原的夹心分析法(Sandwich assay)为例进行说明。对一个抗体标记供体、并对另一个抗体标记受体时，如果二个标记抗体抗原接近，则引起能量转移，产生受体的荧光信号。也就是说，与抗原的量相应，荧光信号也增加，因此，可以均质地定量抗原的量。然而，即使在抗原不存在的情况下，供体与受体也有一定的概率接近，因此，随之产生信号。该信号成为背景信号。

作为降低背景噪音的方法之一，考虑使用亲和性极高的抗体。根据该方法，可以降低测定系统中的抗体浓度，因此，供体与受体的非特异性接近减少，背景信号因而降低。然而，在现实中难以准备可在测定系统中利用的超高亲和性的抗体，即使能够准备，也不可能像进行将未结合的物质分离的工序(以下简称为B/F分离)的异质测定系统那样降低背景的信号。

另外，在发生抗原介导的抗体接近的情况下，并不能确立高效地引起2种荧光物质间的能量转移这样的标记方法。

发明内容

发明所要解决的问题

均质系统中存在反应速度高这样的优点，但存在S/N比不高这样的缺点。于是，在要求高S/N比的测定系统的情况下，大多采用进行B/F分离操作的异质测定系统。这是因为：通过B/F分离操作，可以将不参与反应的物质除去至系统外，因此可以大幅降低背景的信号，S/N比提高。因此，需要在水不溶性载体等上固定与测定对象物具有结合能力的物质(以下，用抗体进行例示)。然而，这样一来，测定对象物与抗体间的反应成为固液反应，因此，与均质反应相比，达到平衡为止耗费时间。

作为缩短反应时间的方法，存在使水不溶性载体逐渐微粒化的方法。这样一来，溶液中的抗体的分散度变高，因此，反应速度逐渐提高。可例示例如：使用磁微粒作为水不溶性载体、用磁力将微粒分离的方法。此外，随着微粒化进行，逐渐接近均质测定系统，因此，反应速度变速，但利用磁力分离等的简便的B/F分离逐渐变得困难，需要利用离心分离操作等的繁杂的分离。也就是说，构筑测定系统本身变得繁杂，在工业上的利用变得困难。

结果，考虑抗原抗体间的反应速度和简便的B/F分离工序这两者，现实的是使用可利用磁力等在短时间内进行B/F分离的数μm至亚微米程度的微粒作为水不溶性载体。

这样一来，为了实现高反应速度与简便的分离，需要进行数μm至亚微米程度的微粒化，但该尺寸的粒子是不透明的。因此存在下述问题：通过直接目视、吸收、荧光等对标记物进行检测的情况下，从检测器观察时不能检测到隐藏在粒子背面的标记物，特别是低浓度域的检测困难。

解决问题的方法