[发明专利]用于测定维生素D的方法和成分

说明书

本发明提供用于测定样品中维生素D部分的方法和成分，例如试剂盒，包括或使用，特别包括，能够使维生素D部分与其结合蛋白分离的缓冲液和/或酸性pH缓冲液，和至少两种抗体，例如至少两种单克隆抗体，其分别偶联在颗粒上，例如乳胶颗粒上，其中至少一种所述抗体(或第一抗体)对维生素D部分具有特异的结合亲和力，而至少另一种所述抗体(或第二抗体)对第一抗体和维生素D部分之间形成的复合物具有特异的结合亲和力，如果存在于所述样品中。在一些实施例中，测量所述抗体与维生素D部分之间的凝集反应引起的光学变化以确定样品中维生素D的含量。还提供用于测定样品中维生素D部分的试剂盒和反应混合物。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年7月29日提交的序列号为62/368,940的美国临时申请的优先权，通过引用将其全部内容并入本文中。

技术领域

本发明主要涉及维生素D检测领域。具体地，本发明提供用于测定样品(如生物液体)中维生素D部分的新方法和试剂盒。

背景技术

维生素D是一种类固醇样、脂溶性激素原。维生素D有两种主要形式：D2(麦角钙化醇)和D3(胆钙化醇)。维生素D3可以由人体在紫外线照射下产生。维生素D3和维生素D2通过它们在肝脏和肾脏中的代谢作用均转化为活性激素1,25-二羟基维生素D。

维生素D3由皮肤经阳光照射(紫外线辐射)后合成以及从饮食中获取，主要来自鱼肝油和蛋黄中。维生素D2主要从营养补充剂中获取，美国唯一用于治疗维生素D缺乏症的处方药由维生素D2制成。维生素D3或D2由肝脏代谢为25(OH)D，然后由肾脏转化为1,25(OH)2D。25(OH)维生素D是反映体内维生素D水平的主要循环形式，但1,25(OH)2维生素D是最具生物活性的形式。

阳光照射不足或者饮食或补充剂摄入不足可能导致维生素D缺乏。维生素D缺乏会减弱骨矿化，导致儿童佝偻病和成人骨软化，并可能导致骨质疏松症。最近的研究表明，维生素D缺乏也与癌症、心血管疾病、糖尿病、多发性硬化症、帕金森病、阿尔茨海默病、药物疗效和全因死亡率有关。

维生素D典型的正常或足够范围约为30-100ng/mL。维生素D水平约为10-30ng/mL被认为是不足。维生素D水平低于10ng/mL被认为是严重缺乏。维生素D水平超过150ng/mL被认为是中毒。

本领域已知多种维生素D测定方法。例如，在美国专利号为5,821,020,7,087,395B1,7,482,162 B2,7,964,363 B2,8,133,694 B2，美国专利公开号为2004/0132104 A1以及WO 2012/091569 A1中公开了多种维生素D测定方法。

仍然需要一种可靠、灵敏和特定的方法来测定样品(如生物液体)中的维生素D部分,尤其是可以进行均相测定的方法和/或适用于典型临床实验室环境中的自动临床化学分析仪的方法。

发明内容

一方面，本发明提供一种用于测定样品中维生素D部分的方法，所述方法包括：a)使含有或疑似含有维生素D部分的样品接触能够使维生素D部分与其结合蛋白分离的缓冲液和/或酸性pH缓冲液，以及至少两种抗体(例如，至少两种单克隆抗体)，其连接到(例如，分别连接到)表面或颗粒，其中一种抗体(例如，一种单克隆抗体或第一抗体)对维生素D部分具有特异的结合亲和力，而另一种抗体(例如，另一种单克隆抗体或第二抗体)对第一抗体和维生素D部分之间形成的复合物具有特异的结合亲和力；和b)评估所述特异性抗体和所述维生素D部分之间的结合以确定所述样品中所述维生素D部分的存在、缺失和/或数量。任选地，所述抗体不同于维生素D部分的天然维生素D结合蛋白。