[发明专利]用于改进高粱的遗传转化的方法

权利要求书

1.一种用于制备高粱的分化胚胎发生愈伤(DEC)组织的方法，所述方法包括将来自高粱的分离的未成熟胚胎(IE)在愈伤组织诱导培养基(CIM)中在足以从所述IE产生DEC组织的时间内和条件下培养，其中所述CIM包含适于培养植物细胞的基础培养基，所述基础培养基补充有一种或多种生长素、一种或多种细胞分裂素和一种或多种减少氧化褐变的剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述CIM具有以下特征中的一个或多个或全部：

(i)所述一种或多种减少氧化褐变的剂是选自由以下组成的组：硫辛酸、褪黑激素、2-氨基茚满-2-膦酸、抗坏血酸、α-生育酚、3,5-二丁基-4-羟基甲苯(BHT)、半胱氨酸、亚硒酸盐、聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)、二硫苏糖醇(DTT)、非那宗和苯噁烷、硝酸银、柠檬酸盐、谷胱甘肽、植酸、去甲二氢愈创木酸(NDGA)和活性炭；

(ii)所述一种或多种减少氧化褐变的剂以约0.1mg/L至约5mg/L、约0.5g/L至约5g/L、约1g/L至约5g/L、或约1g/L的浓度存在于所述CIM中；

(iii)所述一种或多种生长素是选自由以下组成的组：吲哚-3-乙酸(IAA)、4-氯吲哚-3-乙酸、苯乙酸、吲哚-3-丁酸(IBA)、1-萘乙酸(NAA)、2-萘氧基乙酸、4-氯苯氧基乙酸、2,4-二氯苯氧基乙酸(2,4-D)、2,4,5-三氯苯氧基乙酸、2,3,5-三碘苯甲酸、毒莠定以及这些物质中任一者的盐形式；

(iv)所述一种或多种生长素以约0.1mg/L至约5mg/L、约0.1mg/L至约3mg/L、约0.3mg/L至约2mg/L、或约0.5mg/L至约1mg/L的浓度存在于所述CIM中；

(v)所述一种或多种细胞分裂素是选自由以下组成的组：苄基氨基嘌呤(BAP)、玉米素、激动素、2IP、玉米素核糖核苷、二苯基脲和噻苯隆(TDZ)；

(vi)所述一种或多种细胞分裂素以约0.01mg/L至约2mg/L、约0.1mg/L至约2mg/L、约0.5mg/L至约2mg/L、约0.5mg/L至约1mg/L、或约0.5mg/L的浓度存在于所述CIM中；

(vii)所述一种或多种生长素和所述一种或多种细胞分裂素以相对于彼此足以从所述IE产生和/或维持所述DEC的量存在于所述CIM中；并且

(viii)所述一种或多种生长素和所述一种或多种细胞分裂素以约1.25:1、约1.5:1、约1.75:1、约2:1、约2.25:1、约2.5:1、约2.75:1、或约3:1的重量比(生长素:细胞分裂素)存在于所述CIM中。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述CIM包含硫辛酸。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述CIM包含浓度为约0.5mg/L至约2.0mg/L、或约1mg/L的硫辛酸。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述CIM还包含以下中的一种或多种或全部：

(i)浓度为约0.2g/L至约2g/L、约0.5g/L至约1.5g/L、约0.7g/L至约1g/L、或约0.8g/L的蛋白胨；

(ii)呈硫酸铜、氯化铜、硝酸铜、葡糖酸铜或乙酸铜形式的铜；

(iii)其中当存在铜时，所述铜以约0.1mg/L至约5mg/L、约0.3mg/L至约3mg/L、约0.5mg/L至约1.5mg/L、约0.7mg/L至约1mg/L、或约0.8mg/L的浓度存在；和/或

(iv)渗透剂。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述IE的培养在昏暗光条件下进行，持续足以产生所述DEC组织的时间。