[发明专利]α-突触核蛋白检测测定法和用于诊断α-突触核蛋白病的方法

权利要求书

1.一种用于非诊断目的的用于检测生物样品中α-突触核蛋白聚集体存在的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)提供所述生物样品，其中所述生物样品包括：脑匀浆、脑脊液或血液；

(ii)提供包含以下的反应样品：

(a)包含锆/二氧化硅的珠粒群体，其中所述珠粒群体具有0.5mm至0.1mm的平均珠粒直径，并且其中所述珠粒群体的标准直径偏差是平均直径加上或减去10％，

(b)硫黄素T，和

(c)α-突触核蛋白，

(iii)将所述生物样品和所述反应样品混合以形成反应混合物；

(iv)以间歇式搅拌循环孵育所述反应混合物；

(v)用激发所述硫黄素T的波长的光照射所述反应混合物；和

(vi)确定在孵育期间所述反应混合物的荧光水平，

其中步骤(iv)至(vi)同时进行，并且在步骤(iv)至(vi)期间所述反应混合物的所述荧光显著增加表明在所述反应混合物中存在α-突触核蛋白聚集体，并且其中在所述反应混合物中存在α-突触核蛋白聚集体表明在所述生物样品中存在α-突触核蛋白聚集体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述反应样品是经过缓冲的反应样品，并且其中将所述反应样品缓冲以维持所述反应样品的pH在pH 6至pH 8.5。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述反应样品包含0.01mg/mL的α-突触核蛋白至10mg/mL的α-突触核蛋白以充当聚集底物。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述反应样品的所述α-突触核蛋白是全长α-突触核蛋白。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述反应样品是经过缓冲的反应样品，并且其中将所述反应样品缓冲以维持所述反应样品的pH在pH 8.2。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述反应样品还包含磷酸盐缓冲液。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述磷酸盐缓冲液以100mM的浓度存在。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述硫黄素T以10μM的浓度存在。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述反应样品包含0.1mg/mL的人全长重组α-突触核蛋白以充当聚集底物。

10.一种用于非诊断目的的用于检测脑匀浆样品中α-突触核蛋白聚集体存在的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)提供所述脑匀浆样品；

(ii)提供包含以下的反应样品：

(a)包含玻璃的珠粒群体，其中所述珠粒群体具有0.5mm的平均珠粒直径，并且其中所述珠粒群体的标准直径偏差是平均直径加上或减去10％；

(b)硫黄素T；和

(c)α-突触核蛋白，

(iii)将所述脑匀浆样品和所述反应样品混合以形成反应混合物；

(iv)以间歇式搅拌循环孵育所述反应混合物；

(v)用激发所述硫黄素T的波长的光照射所述反应混合物；和

(vi)确定在孵育期间所述反应混合物的荧光水平，

其中步骤(iv)至(vi)同时进行，并且在步骤(iv)至(vi)期间所述反应混合物的所述荧光显著增加表明在所述反应混合物中存在α-突触核蛋白聚集体，并且其中在所述反应混合物中存在α-突触核蛋白聚集体表明在所述脑匀浆样品中存在α-突触核蛋白聚集体。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述反应样品还包含磷酸盐缓冲液。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述硫黄素T以10μM的浓度存在。

13.根据权利要求10所述的方法，其中所述反应样品包含0.1mg/mL的所述α-突触核蛋白以充当聚集底物。