[发明专利]抗NRP1抗体筛选方法

说明书

本公开文本涉及通过使用过表达NRP1的患者来源的肿瘤球体和包含该肿瘤球体的动物模型筛选抗NRP1抗体或其抗原结合片段的方法，并且更具体地涉及通过分别使用含有NRP1的患者来源的肿瘤球体和移植有该肿瘤球体的动物模型通过体外和体内淘选来筛选抗体或其抗原结合片段的方法。

技术领域

本公开文本涉及通过使用过表达NRP1的患者来源的肿瘤球体和包含该肿瘤球体的动物模型筛选抗NRP1抗体或其抗原结合片段的方法，并且更具体地涉及通过分别使用含有NRP1的患者来源的肿瘤球体和移植有该肿瘤球体的动物模型通过体外和体内淘选来筛选抗体或其抗原结合片段的方法。

背景技术

神经毡蛋白(NRP)包括首先在神经细胞中发现的NRP1和NRP2。已知NRP1由约923个氨基酸构成，NRP2由约926个氨基酸构成。此外，它们共同具有相似的结构域结构，并且因此具有总共44％的氨基酸同源性。

神经毡蛋白(NRP)包括首先在神经细胞中发现的NRP1和NRP2。已知NRP1由约923个氨基酸构成，NRP2由约926个氨基酸构成。此外，NRP1和NRP2共同具有相似的结构域结构，并且因此具有总共44％的氨基酸同源性。

已知NRP1是与臂板蛋白3A配体结合的受体，该臂板蛋白3A配体作用于丛蛋白辅助受体以调节轴突诱导。然后发现NRP1与血管内皮生长因子(VEGF)配体家族的成员结合，从而介导血管生成。

通过血管系统的发育，出现众多的生理过程和病理过程。血液必然充分供应给诸如肿瘤的活跃生长的组织。这些组织通常产生促进新血管形成和维持的促血管生成因子，从而通过血管生成而供应血液。血管生成不是一个简单的过程，而是通过以下步骤完成的：a)内皮细胞(EC)从现有的内皮细胞增殖或分化；b)内皮细胞迁移并聚结形成索状结构；c)血管索进展为小管形成并且形成在中心具有管腔的血管；d)现有索或血管的芽开始形成二级血管；e)原始丛进一步再生长和再生；和f)内皮细胞被置于内皮管中以便为血管提供维持和调节功能(这些细胞包括在小毛细血管情况下的周细胞、在大血管情况下的平滑肌细胞以及在心脏中的心肌细胞)。

已知NRP1在多种人肿瘤细胞系和人类肿瘤(比如胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、睾丸癌、结肠直肠癌、黑素瘤、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、食道癌和前列腺癌)中表达。还已知NRP1参与VEGF和臂板蛋白对癌细胞的增殖、存活和转移的作用。此外，已知的是，根据NRP1表达的程度，癌症进展的程度增加或癌症患者的预后差。

当肿瘤生长时，血管生成在从增生到瘤形成的转变中是至关重要的，并且可能在为肿瘤生长和转移提供营养物质中起关键作用。与正常细胞相比，新血管形成允许肿瘤细胞获得生长优势和增殖自主性。由于到可用的毛细血管层的距离的缘故，肿瘤通常以能在仅仅几立方毫米内增殖的单个异常细胞开始，并且能够长期处于停滞的“潜伏”状态，而没有进一步的生长和传播。随后，一些肿瘤细胞转化为血管生成表型，从而激活内皮细胞，并且增殖和成熟为新的毛细血管。这些新形成的血管不仅允许原发肿瘤连续生长，而且还能使转移性肿瘤细胞增殖和再定殖。

在这方面，需要能够以高亲和力与NRP1结合并抑制癌细胞生长的抗NRP1抗体，以治疗其中NRP1过表达的癌症。

抗体药物由于其高疗效和靶向治疗特性而在生物制药领域中增长最快。抗生素药物市场是200种生物制药中增长最快的领域，占生物制药市场总量的比例很高(37％)，抗体药物的全球市场预计在2012年以11.8％的年均增长率(为515亿美元)增长，在2017年达到899亿美元(2013Biopharmaceutics Trend Report,the Korean Ministry of Trade,Industry and Energy,2013)。

作为抗体药物主要靶标的疾病主要集中在特定的疾病，如难治性癌症(49％)和免疫疾病(35％)，因此在具有相似适应症的产品之间的市场竞争非常激烈。然而，在疾病中存在细分的治疗靶标，因此用于抗癌疗法的抗体治疗药物的开发领域肯定会在未来继续增长。