[发明专利]C4二羧酸的制造方法

说明书

本发明涉及宿主细胞中的C4二羧酸生产能力的提高。本发明提供一种多肽，其由序列号2表示的氨基酸序列或与该序列具有至少90％的同一性的氨基酸序列构成。

技术领域

本发明涉及一种生物学的C4二羧酸制造。

背景技术

C4二羧酸作为酸味料或抗菌剂、pH调节剂在食品工业中被利用于各种各样的用途，此外，也用作合成树脂或生物分解性聚合物的原料等，为工业的价值高的物质。C4二羧酸在工业上通过源自石化原料的化学合成、或微生物发酵的任意种而制造。从前，为了成本更低，化学合成法为主流，但近年来，从原料的昂贵、或环境负荷等观点出发，利用以循环再生资源为原料的微生物发酵的制造方法备受关注。

已知有作为C4二羧酸之一的富马酸可以使用根霉属菌(Rhizopus)等发酵菌而制造。根霉属菌将葡萄糖作为碳源生产富马酸，排出至菌体外。迄今为止，关于用于根霉属菌的富马酸高生产化的方法，已知有培养法的改良或变异育种的高生产率菌株的制作等。但是，由于根霉属菌的遗传学的背景还没有充分地进行研究，因此，利用基因重组的根霉属菌的富马酸高生产化技术的开发不容易，报道也少。仅报道有将编码源自酿酒酵母的丙酮酸羧化酶的基因导入至戴尔根霉(专利文献1)、及将编码源自大肠杆菌的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶的基因导入至米根霉(非专利文献1)引起的富马酸生产率提高。

(专利文献1)中国专利申请公开第103013843号说明书

(非专利文献1)Metabolic Engineering，2012，14：512-520

发明内容

本发明提供一种多肽，其由序列号2表示的氨基酸序列或与该序列具有至少90％的同一性的氨基酸序列构成。

另外，本发明提供一种多核苷酸，其编码上述多肽。

另外，本发明提供一种载体或DNA片段，其含有上述多核苷酸。

另外，本发明提供一种转化细胞，其含有上述多核苷酸或载体或DNA片段。

进而，本发明提供一种C4二羧酸的制造方法，其包含将上述转化细胞进行培养。

进而，本发明提供一种转化细胞的制造方法，其包含将上述多核苷酸或载体导入至宿主细胞。

进而，本发明提供一种宿主细胞中的C4二羧酸生产能力的提高方法，其包含将上述多核苷酸或上述载体或DNA片段导入至宿主细胞，或者强化上述多核苷酸的表达。

具体实施方式

本发明涉及一种具有提高宿主细胞的C4二羧酸生产能力效果的多肽、编码该多肽的基因、含有该基因的转化细胞，以及使用该转化细胞的C4二羧酸的制造方法。

本发明人进行了深入研究的结果发现：使由序列号2表示的氨基酸序列构成的多肽的表达强化的细胞能够提高C4二羧酸生产能力。

本发明的多肽具有提高细胞的C4二羧酸生产能力的功能。本发明的多肽的表达被强化的细胞(例如导入有编码该多肽的基因的细胞)可以更快地生产C4二羧酸。因此，本发明的多肽及强化了其表达的细胞可用于C4二羧酸的生物学的生产。本发明的上述及其它特征及优点由以下的本说明书的记载进一步明确。

(1.定义)

本说明书中，氨基酸序列或核苷酸序列的同一性利用Lipman-Pearson法(Science，1985，227:1435-1441)进行计算。具体而言，使用遗传信息处理软件GENETYCSVer.12的同源性分析程序的氨基酸序列×氨基酸序列最大匹配或核苷酸序列×核苷酸序列最大匹配，通过将Maches作为-1、将Mismatches作为1、将Gaps作为1、*N+2进行分析而算出。